[发明专利]α-芋螺毒素肽LvIA/LvD21、其药物组合物及用途

权利要求书

1.一种多肽，其为或者包含选自如下（1）至（3）中任一项所述的氨基酸序列：

（1）SEQ ID NO：3或者SEQ ID NO：4或者SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列;

（2）与上述（1）所述氨基酸序列至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、尤其优选至少95％、最优选至少97％相同的氨基酸序列；或

（3）被1－5个、优选1－3个、更优选1－2个、最优选1个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加而与上述（1）或（2）所示序列有所不同的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的多肽，其中，所述多肽的N末端的第一个半胱氨酸与第三个半胱氨酸形成二硫键，并且第二个半胱氨酸与第四个半胱氨酸形成二硫键；或所述多肽的N末端的第一个半胱氨酸与第四个半胱氨酸形成二硫键，并且第二个半胱氨酸与第三个半胱氨酸形成二硫键；或所述多肽的N末端的第一个半胱氨酸与第二个半胱氨酸形成二硫键，并且第三个半胱氨酸与第四个半胱氨酸形成二硫键；具体地，所述多肽的羧基末端是酰胺化的。

3.一种多核苷酸，其编码权利要求1或2所述多肽的氨基酸序列。

4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其为或者包含选自如下的（1）至（3）中任一项所述的核苷酸序列：

（1）SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：5或SEQID NO：7或SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列；

（2）上面（1）中所述核苷酸序列的互补序列；

（3）在严谨条件下能够与上述（1）中所述的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

5.一种核酸构建体，其包含权利要求3或4所述的多核苷酸。

6.一种表达载体，其包含权利要求5所述的核酸构建体。

7.一种转化的细胞，其包含权利要求6所述的表达载体。

8.一种融合蛋白，其包含权利要求1或2所述的多肽。

9.一种药物组合物，其包含权利要求1或2所述的多肽，或者包含权利要求8所述的融合蛋白；可选地，其还包含药学上可接受的载体或辅料。

10.一种在体内或体外阻断乙酰胆碱受体或者调节乙酰胆碱水平的方法，包括使用有效量的权利要求1或2所述的多肽或权利要求8所述的融合蛋白的步骤；具体地，所述乙酰胆碱受体是α3β2乙酰胆碱受体。

11.一种筛选乙酰胆碱受体抑制剂或者确定乙酰胆碱受体亚型的方法，该方法包括：通过在存在和不存在候选化合物存在的情况下将乙酰胆碱受体与权利要求1或2所述的多肽或权利要求8所述的融合蛋白进行接触的步骤；具体地，所述乙酰胆碱受体为α3β2乙酰胆碱受体。

12.权利要求1或2所述的多肽或权利要求8所述的融合蛋白用于阻断乙酰胆碱受体的用途；具体地，所述乙酰胆碱受体是α3β2乙酰胆碱受体。

13.权利要求1或2所述的多肽或权利要求8所述的融合蛋白在制备阻断乙酰胆碱受体的药物或试剂中的用途；具体地，所述乙酰胆碱受体是α3β2乙酰胆碱受体。

14.权利要求1或2所述的多肽或权利要求8所述的融合蛋白在制备治疗和/或预防神经系统疾病例如神经痛与成瘾、帕金森症、痴呆、精神分裂症、抑郁、或癌症的药物的用途，或者用于制备杀灭害虫、镇痛、戒烟、戒毒的药物的用途；具体地，所述成瘾由如下原因导致：各种精神活性物质，包括尼古丁、鸦片、海洛因、甲基苯丙胺（冰毒）、吗啡、大麻、可卡因以及国家规定管制的其它能够使人形成瘾癖的麻醉药品和精神药品等。具体地，所述神经痛由如下原因导致：癌症与癌症化疗、酒精中毒、坐骨神经痛、糖尿病、三叉神经痛、硬化症、带状疱疹、机械伤和手术伤、艾滋病、头部神经瘫痪、药物中毒、工业污染中毒、淋巴神经痛、骨髓瘤、多点运动神经痛、慢性先天性感觉神经病、急性剧烈自发性神经痛、挤压神经痛、脉管炎、血管炎、局部缺血、尿毒症、儿童胆汁肝脏疾病、慢性呼吸障碍、复合神经痛、多器官衰竭、脓毒病/脓血症、肝炎、卟啉症、维生素缺乏、慢性肝脏病、原生胆汁硬化、高血脂症、麻疯病、莱姆关节炎、感觉神经束膜炎、或过敏症。

15.权利要求1或2所述的多肽的制备方法，包括下述步骤：

1）在ABI Prism 433a多肽合成仪上或者手工方法合成线性多肽，Fmoc氨基酸的侧链保护基为:Pmc(Arg)、Trt(Cys)、But(Thr、Ser、Tyr)、OBut(Asp)、Boc(Lys)；半胱氨酸用Trt或Acm保护基团，分别在相应的半胱氨酸之间定点形成二硫键；

2）将步骤1）中得到的线性多肽从树脂上切割下来，并用冰乙醚沉淀和洗涤回收线性多肽粗品，用制备型反向HPLC C18柱（Vydac)纯化；

3）将步骤2）中得到的产物进行两步氧化折叠。