[发明专利]一种用于靶向药物载体的核酸适体

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于靶向药物载体的核酸适体。

背景技术

癌症是一类引起人类死亡的主要疾病，每年全球因癌症死亡人数大约为700万。随着细胞生物学的发展以及对癌症发病机制的了解，癌症的化学药物治疗得到了很好的发展。目前大约有90多种化学药物发展用于杀死肿瘤细胞和癌症治疗。但是这些药物缺乏靶向特异性，在临床上通常给患者带来致命的副作用。同时，小分子核酸药物在体外抗肿瘤实验中都取得了比较好的结果，但是一旦应用于体内，就会被人体内的酶所分解；而体外对小分子核酸药物进行修饰后，虽然可以抵御酶的切割，但是又改变了作用机理。因此需要发展既能靶向携带药物攻击肿瘤细胞，又能抵御核酸酶降解的靶向载体。

核酸适体是通过指数富集的配体系统进化法从DNA/RNA文库中筛选出来的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。它通过分子内碱基堆积、疏水、氢键和静电等作用力折叠成独特的空间结构，从而高特异性和高亲和力识别其靶标分子。核酸适体与靶标分子结合的特异性和亲和力与抗体相似，甚至更强。核酸适体具有较低的分子量、无免疫原性、快速的组织通透性和良好的代谢动力学。核酸适体一旦证实，就可以通过自动化的固相合成的方法制备，从而保证了不同批次之间产品不会存在差异。核酸适体化学性质稳定和容易通过化学修饰赋予其其它功能。

更重要的是，与抗体相比，核酸适体的靶标范围更广。一些与疾病紧密相关的生长因子、酶、受体以及肿瘤标志物等物质都能成为核酸适体的靶标。目前针对血管表皮生长因子受体的核酸适体作为治疗老年湿性黄斑疾病药物已经被FDA批准上市；同时还有八种核酸适体药物处于不同临床考察阶段。因此针对与疾病相关分子的核酸适体作为一种潜在的靶向载体携带药物吸引着研究者的注意。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种核酸适体。

本发明提供的核酸适体，其为序列表中序列1所示的单链DNA分子。

上述的核酸适体作为药物载体的应用也是本发明保护的范围。

本发明的另一个目的是提供一种药物载体。

本发明提供的药物载体，其活性成分为上述的核酸适体。

上述应用或药物载体中，所述药物为如下1）或2）：

1）预防和/或治疗肿瘤的药物；所述肿瘤具体为肺腺癌；

2）杀伤和/或抑制肿瘤细胞的药物；所述肿瘤细胞具体为肺腺癌细胞；所述肺腺癌细胞进一步具体为A549细胞系。

本发明的第三个目的是提供一种产品。

本发明提供的产品，为由上述的核酸适体和靶药物连接得到的产物；所述产品为如下1）或2):

1）预防和/或治疗肿瘤的产品；

2)杀伤和/或抑制肿瘤细胞的产品。

上述产品中，所述靶药物为C70三加成丙二酸二乙酸（TF70）；该化合物通过如下方法合成：

1）向10mg C₇₀中加入25ml甲苯溶液，搅拌分散均匀，得到C₇₀甲苯溶液；向恒压漏斗中加入21ml甲苯溶液；

2）向C₇₀甲苯溶液中通入氮气十分钟，再向C₇₀甲苯溶液中加入8.1μl溴代丙二酸二乙酯；向恒压漏斗中的甲苯溶液中加入7.1μl DBU溶液，轻摇漏斗，使分散均匀，得到含DBU的甲苯溶液（溴代丙二酸二乙酯：DBU=1:1，DBU：C₇₀=6:1，物质的摩尔比）；

3）继续通入氮气十分钟，打开恒压漏斗，开始滴加含DBU的甲苯溶液，控制溶液一小时内加完，继续反应两小时，停止反应，以一次性滤器过滤，收集清液于50ml单口瓶中，放置过夜后过高效液相色谱柱，流动相为甲苯，流速为6ml/min。先进样2ml，观察保留时间为40分钟的峰形，确定需要收取的的样品组分以及每次的进样间隔；

4）收集纯化后的C₇₀衍生物，取样进行质谱检测。其余部分旋转蒸发去除样品中的甲苯，加入40ml乙醇。超声分散贴在瓶壁的C₇₀衍生物，搅拌使C₇₀衍生物尽量分散在乙醇溶液中。以氢氧化钠的乙醇溶液（20mg NaOH，1ml H₂O，9ml乙醇）水解C₇₀衍生物得到相应的富勒酸衍生物，以0.2μm滤器过滤，将溶液收集于无菌容器中封口备用，4℃保存备用，得到TF70。

上述产品中，上述的核酸适体和上述C70三加成丙二酸二乙酸通过酰胺键连接。