[发明专利]ath-eTM160在抑制microRNA160功能中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种ath-eTM160及其在抑制microRNA160功能中的应用。

背景技术

MicroRNA（miRNA）是一类重要的小分子RNA，它们参与调控植物的生长发育以及胁迫反应等多个途径。在植物中，miRNA主要通过降解靶基因的方式发挥作用。首先，成熟的miRNA通过碱基互补匹配的方式与靶基因结合，然后引起结合位置靶基因mRNA的切割（切割主要发生在互补区域的10与11位之间），进而导致靶基因的降解。最近，有研究者报道了一个IPS1基因，虽然该基因能部分的与miR399序列互补匹配，但在切割位置上IPS1形成3个碱基的凸起，该凸起使IPS1不能被miR399切割，也就不能被降解。当细胞内高表达IPS1时，其与miR399结合，这导致miR399不能与其靶基因结合，进而使其靶基因不受miR399调控。IPS1被称为内源的模拟靶基因（endogenous Target Mimic-eTM）。IPS1可以作为抑制miR399的工具，应用于miR399的相关研究。而其它miRNA的内源模拟靶基因未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种ath-eTM160及其在抑制microRNA160功能中的应用。

本发明提供的DNA分子，为一种内源DNA分子，命名为ath-eTM160，其为如下(1）-(3）中任一一种的DNA分子：

(1）序列表中的序列1自5′末端第8-187位核苷酸所示的DNA分子；

(2）在严格条件下与（1）限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；

(3）与（1）限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的DNA分子。

上述严格条件可为如下：在6×SSC，0.5%SDS的溶液中，在65°C下杂交,然后用2×SSC,0.1%SDS和1×SSC,0.1%SDS各洗膜一次。

含有上述DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌也是本发明保护的范围。

上述重组载体为将上述DNA分子插入表达载体中，得到的重组载体。在本发明的实施例中，重组载体为序列表中的序列1自5′末端第8-187位核苷酸插入pCAMBIA1300的Xba Ⅰ和Sac Ⅰ酶切位点间得到的载体

扩增上述DNA分子的全长或其任意片段的引物对也是本发明保护的范围。

上述DNA分子或上述重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在调控植物中microRNA160表达或其靶基因表达或改变植物叶片形状中的应用也是本发明保护的范围；其中，所述microRNA160的核苷酸序列为序列表中的序列5。

上述应用中，所述microRNA160的靶基因为ARF10、ARF16和/或ARF17。ARF10的核苷酸序列为序列表中的序列2；ARF16的核苷酸序列为序列表中的序列3；ARF17的核苷酸序列为序列表中的序列4。

上述应用中，所述调控植物中microRNA160表达为抑制植物中microRNA160表达；所述调控植物中microRNA160靶基因表达为提高植物中microRNA160靶基因表达；所述改变植物叶片形状为增强植物叶片边缘锯齿化；所述植物具体为双子叶植物或单子叶植物，所述双子叶植物进一步具体为拟南芥。

上述抑制植物中microRNA160表达通过提高目的植物中microRNA160表达实现。

上述应用为将上述DNA分子导入目的植物，得到转基因植物；

所述转基因植物具有如下1）-3）中至少一种特征：

1）所述转基因植物中microRNA160表达量低于所述目的植物；

2）所述转基因植物中microRNA160的靶基因ARF10、ARF16和/或ARF17表达量均高于所述目的植物；

3）所述转基因植物叶片边缘锯齿化。

上述DNA分子通过上述重组载体导入目的植物中。

上述应用中，所述目的植物为双子叶植物或单子叶植物，所述双子叶植物具体为拟南芥。