[发明专利]重组柯萨奇病毒B3型病毒样颗粒的制备方法及其应用

权利要求书

1.柯萨奇病毒B3型病毒样颗粒的制备方法，包括如下步骤：

1）将柯萨奇病毒B3型的P1基因和3CD基因克隆到目的质粒中，得到重组表达载体；

2）用步骤1）得到的重组表达载体转化目的酵母细胞，得到表达所述P1基因和所述3CD基因的重组酵母细胞；

3）裂解步骤2）得到的重组酵母细胞，分离得到重组的柯萨奇病毒B3型病毒样颗粒。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述P1基因和所述3CD基因均为经过密码子优化的基因；所述优化为在不改变野生型柯萨奇病毒B3型P1蛋白和野生型柯萨奇病毒B3型3CD蛋白氨基酸序列的前提下，将野生型柯萨奇病毒B3型P1基因和野生型柯萨奇病毒B3型3CD基因的密码子替换为酵母细胞偏好的密码子。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述P1基因的核苷酸序列为序列表中序列1所示；所述3CD基因的核苷酸序列为序列表中序列2所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述目的酵母细胞为酿酒酵母、多形汉逊酵母、巴斯德毕赤酵母、胞壁克鲁维氏酵母、乳克鲁维氏酵母或粟酒裂殖糖酵母。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述P1基因和所述3CD基因在所述重组表达载体中各由一个启动子驱动转录，驱动所述P1基因的启动子方向和驱动所述3CD基因的启动子方向相反。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述重组表达载体为将所述P1基因和所述3CD基因分别插入到pESC-URA的两个多克隆位点处各由一个启动子驱动转录得到的重组质粒。

7.利用权利要求1-6中任一所述方法制备得到的柯萨奇病毒B3型病毒样颗粒。

8.密码子优化型的柯萨奇病毒B3型的P1基因，其特征在于：所述P1基因的核苷酸序列为序列表中序列1所示；或

密码子优化型的柯萨奇病毒B3型的3CD基因，其特征在于：所述3CD基因的核苷酸序列为序列表中序列2所示。

9.含有权利要求8所述P1基因和/或3CD基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

10.权利要求8所述P1基因和/或3CD基因在制备下述a）或b）产品中的应用：

a）柯萨奇病毒B3型病毒样颗粒；

b）以柯萨奇病毒B3型病毒样颗粒为活性成分的预防性疫苗。