[发明专利]高效表达HA蛋白的重组流感病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种PR8重组流感病毒，其特征在于，其含有H4亚型流感病毒的HA和/或NA基因、含有PR8病毒的6个内部基因(PB1，PB2，PA，NP，M，NS基因)，其中NS和NP基因或二者之一含有以下突变位点：NS基因编码的NS2蛋白上具有E67S点突变、或E74S点突变、或E67S/E74S点突变，NP基因编码的NP蛋白上具有G132A点突变。

2.一种制备权利要求1所述的PR8重组流感病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

构建分别包含H4亚型流感病毒的HA和NA基因的重组质粒；

构建包含PR8病毒突变基因片段的重组质粒，该PR8病毒突变基因片段选自下述突变的NS或NP基因片段：编码含有E67S、或E74S、或NS2E67/74S点突变的NS2蛋白的PR8病毒NS基因片段，编码含有G132A点突变的NP蛋白的PR8病毒NP基因片段；

将上述H4亚型流感病毒的HA基因的重组质粒和NA基因的重组质粒，与上述包含PR8病毒突变基因片段的重组质粒、以及分别包含PR8病毒PA、PB1、PB2、M、NP或NS内部基因的质粒按相应组合一起转染293T细胞，培养转染后的细胞；

将培养的细胞上清接种于鸡胚，在孵化器内培养合适时间后，收获鸡胚尿囊液，检测该尿囊液的血凝性，如果有血凝活性，并且经过序列分析确定没有非预期突变后，即获得PR8重组流感病毒。

3.权利要求1所述的PR8重组流感病毒在制备流感疫苗中的应用。

4.一种疫苗，其特征在于，包含权利要求1所述的PR8重组流感病毒。