[发明专利]一种山药珠芽的组培方法

说明书

技术领域

本发明属于一种植物的组培技术，特别地涉及山药珠芽的组培技术。

背景技术

山药（Dioscorea opposita Thunb.），别名薯蓣、怀山药，为薯蓣科多年生缠绕草本植物。其根茎经去外皮干燥后可入药，具补脾胃，补肺益阴，固肾涩精等作用，主治体倦，虚劳咳嗽，肺虚咳喘，肾虚遗精等症，除药用外还可食用。

山药的传统繁殖方法主要有两种，一种是芦头繁殖法，一种是珠芽繁殖法。芦头繁殖法主要是指选取芦头（脖颈短）、粗壮、无病虫害、芽头饱满的山药，将上部7-10厘米长折下，置于室内通风处晾5-7天，贮藏于室内或窖内越冬。翌年4月取出用于种植。珠芽繁殖法是指选取无病虫害、无损伤、个头较大的珠芽。用湿沙埋在室内或窖内过冬，防止受冻或受热，翌年4月取出用于种植。

相对于芦头繁殖来说，珠芽繁殖的成活率更高，而且长期使用芦头繁殖存在严重的退化现象，另外珠芽的体积小，便于保存和运输，因此从上述角度来说珠芽繁殖要优于芦头繁殖，但是珠芽繁殖也有其自身的缺陷，那就是珠芽比芦头更加娇嫩，需要更严格的贮存条件。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种山药珠芽的组培方法，通过这种方法能让珠芽在短时间内快速大量地增殖，从而大大降低需要贮存的珠芽数量，同时也大大提高了珠芽繁殖的范围。

本发明所述的山药珠芽的组培方法如下：

1、外植物体取材和消毒。将从山药上取下的珠芽切成长宽分别为0.5-1厘米的方块状，用自来水冲洗干净后用洗衣粉溶液浸泡15分钟，再用自来水冲洗干净。将珠芽块置于超净工作台上，先用75%酒精消毒30秒，然后用0.1%的升汞溶液浸泡5分钟，随后用无菌水冲洗3-4次，置于无菌的干净培养皿中备用。

2、培养基的配置和接种。配置两种培养基，一种为诱导培养基，一种为增殖培养基，诱导培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤3.0mg/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。增殖培养基的配方为：在MS培养基中加入6-苄氨基腺嘌呤5.0mg/L，萘乙酸0.3ml/L，蔗糖30g/L，琼脂8g/L，pH6.0。在超净台中将珠芽芽体朝上接种于诱导培养基上。培养温度为25±1℃，光照强度1200lx，光照时间10h/d。

3、丛生珠芽的增殖。在山药珠芽在诱导培养基上已经长出丛生珠芽之后，将丛生珠芽从主体上切下，将其转移到增值培养基上进行继代扩繁。

4、驯化移栽。将生长出的珠芽移植至通风、明亮的炼苗室中，揭开培养皿盖子，将珠芽取出，洗净粘在其上的培养基，用0.1%的高锰酸钾溶液浸泡10-15分钟，再转移到已消毒的苔藓基质上。移栽后适当浇水，保持光照在1500-2000lx之间，温度为25-30℃，光照时间12h/d，空气湿度大于90%。

其中步骤2中提到的MS培养基的配方是本领域技术人员所共知的，其配方为：

工作液浓度单位mg/L

大量元素：NH₄NO₃ 1650；KNO₃ 1900；CaCl₂·2H₂O 440；MgSO₄·7H₂O 370；KH₂PO₄170；

微量元素：KI 0.83；H₃BO₃ 6.2；MnSO₄·4H₂O 22.3；ZnSO₄·7H₂O 8.6；Na₂MnO₄·2H₂O0.25；CuSO₄·5H₂O 0.025；CoCl₂·6H₂O 0.025；

铁盐：FeSO₄·7H₂O 27.8；Na₂-EDTA·2H₂O 37.3

有机物质：肌醇100；烟酸0.5；盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5；盐酸硫胺素（维生素B1）0.1；甘氨酸2.0。

其中山药珠芽在诱导培养基上长出丛生珠芽大约需要13-15天，在增殖培养基上，大约10天左右又可生产新的丛生珠芽，驯化移栽的时间以5-7天为宜。