[发明专利]一种银杏叶提取物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物化学领域，尤其涉及一种银杏叶提取物的制备方法。

背景技术

银杏(Ginkgo biloba L.)又名公孙树，白果，是裸子植物银杏科植物，是当今地球上最古老的树种之一。银杏全身都是宝，集果用、叶用、材用、花粉用、防护用和观赏用于一身。银杏的药用价值，我国古代就有记载，《本草纲目》记载，白果可“入肺经、益脾气、定咳喘、缩小便、性平味甘苦涩，有小毒”，可治哮喘、痰咳、白带、遗精、淋病、小便频数等。银杏是一种药用价值极高的植物，而银杏叶中的活性成分的研究备受亲睐。

银杏叶提取物的主要生物活性成分是总黄酮类和萜类内酯类，总黄酮以山奈酚(kaempferol)、槲皮素(quercitrin)、异鼠李素(lsorhamntin)的苷为主；萜类内酯则以银杏内酯(ginkgolide A.B.C)和白果内酯(bilodalide)为主。银杏提取物具有强抗氧化性，能有效清除体生物内过剩的自由基，达到延缓衰老的功能；银杏提取物的萜类化合物具有抗血小板凝集的功能。此外，银杏叶提取物可扩张冠脉血管，增加脑血流量，拮抗血小板活化因子，可治疗由于血管老化、脑血管供血不足所致的多种疾病。

关于银杏叶提取物的制备方法研究，国内外已经有大量报道。这些提取银杏叶中活性成分的方法，具有操作繁琐、成本高、有效成分流失严重、提取物收率较低、污染严重、不利于工业化生产等缺点。

发明内容

为了克服上述银杏叶提取物制备方法的缺陷，本发明提供一种方法简单、操作方便、收率极高、成本低廉、提取物中无有毒试剂残留、污染小的银杏提取物制备方法。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案，具体操作方法为：

步骤1)将银杏叶投于提取罐中，用乙醇水溶液热回流提取，合并提取液，浓缩得到密度为0.7-1.2g/ml的浓缩物A；

步骤2)浓缩物A用水溶解后投入到DM130、AB-8、DM131或D318大孔吸附树脂柱中充分吸附，依次用体积分数为0％、10-30％、40-80％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集40-80％乙醇水洗脱液并浓缩得到浓缩物B；浓缩物B用乙醇水溶液溶解后投入到D101、HPD100、LKY134或DM2大孔吸附树脂柱中充分吸附，用体积分数为40-80％的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至密度为0.7～1.2g/ml，得到浓缩物C；

步骤3)浓缩物C中加入乙醇水溶液回流溶解，并常温过滤除去不溶杂质，将滤液浓缩，干燥后到银杏叶提取物成品。

将制备的银杏叶提取物通过高效液相进行表征鉴定，与2010版中国药典的表征数据一致；同时采用高效液相色谱法分析银杏叶提取物成品总银杏酸、总黄酮醇苷、萜类内酯的含量与收率。

所述步骤1)中，经过发明人多次预实验，发现乙醇水体积分数为50-85％时，对银杏叶中总黄酮类、萜类内酯化合物的提取比较完全。体积分数为50-85％乙醇水溶液的用量以投料的银杏叶体积的8-15倍体积为宜，低于8倍体积时，提取液浓度过高，使得提取效率明显降低；高于15倍体积时，很容易将其他杂质成分引入提取液中，增加了后续工作的难度，加之提取液总体积急剧增加，加大了浓缩的工作量。

所述步骤1)中，用乙醇水溶液热回流提取银杏叶的温度控制在70-90℃为宜，温度过低会降低提取效率，温度过高容易破坏银杏叶中的有效成分。

所述步骤1)中，用乙醇水溶液热回流提取银杏叶的次数优选2-4次，每次1.5-2.5小时，进一步的，优选为提取次数为2次，每次提取2小时。

所述步骤2)中，经发明人反复筛选，结合银杏叶提取物有效成分的理化分析，最终选定以DM130、AB-8、DM131或D318大孔吸附树脂柱对银杏叶提取浓缩物进行乙醇水溶液梯度洗脱，用D101、HPD100、LKY134或DM2大孔吸附树脂柱对浓缩物B进行进一步纯化，其分离效果好，且溶剂可以回收利用，便于产业化生产。

所述步骤2)中，发明人对银杏叶提取浓缩物进行梯度洗脱时，依次用1倍柱体积纯水、2倍柱体积的体积分数为10-30％乙醇水溶液进行梯度洗脱，能有效去除浓缩物中的色素及其大极性成分，提高银杏提取物有效成分的纯度；用3倍柱体积的体积分数为40-80％乙醇水溶液梯度洗脱，能有效富集有效成分，提高有效成分的含量。

所述步骤3)中，结合银杏叶中总黄酮类及其萜类内酯的理化性质，选用10-30倍体积分数为60-95％的乙醇水溶液对浓缩物C回流溶解，进一步除去杂质，增加总黄酮类及其萜类内酯的纯度。