[发明专利]一种从八角莲中提取鬼臼毒素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鬼臼毒素的提取方法，特别涉及一种从八角莲中提取鬼臼毒素的方法。

背景技术

八角莲是为小檗科植物八角莲、六角莲和川八角莲的根及根茎。化痰散结；祛瘀止痛；清热解毒。用于咳嗽；咽喉肿痛；瘰疬；瘿瘤；痈肿；疔疮；毒蛇咬伤；跌打损伤；痹证。八角莲中含有鬼臼毒素，结构式为：

研究表明:鬼臼毒素针对尖锐湿疣、多发性浅表性上皮瘤病（如多发性浅表性或浸润性基底细胞上皮瘤，鳞状细胞上皮瘤和基底鳞状细胞上皮瘤），前上皮瘤性角化病，脂溢性角化、日光性角化和射线角化病，幼年喉头乳头瘤、疣（寻常疣、丝状疣）。鬼臼毒素能有效抑制疱疹病毒，抑制细胞中期的有丝分裂，用于毒性性病。将98%以上鬼臼毒素制成0.5%的酊剂用于尖锐湿疣疗效显著。尚没有适用于高纯度鬼臼毒素工业化大生产的制备工艺报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利于大生产操作、产品纯度高鬼臼毒素的提取方法。

本发明的目的是这样实现的：

一种从八角莲中提取鬼臼毒素的方法，所述的方法由下列步骤组成:取八角莲，粉碎，加入其质量15-20倍量体积的浓度为80-90%的乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率300-600W,萃取2-4次，每次5-20分钟，合并萃取液，滤过，减压回收乙醇并浓缩，加入到大孔吸附树脂柱上吸附,50-70%乙醇洗脱，收集3-8倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，加到聚酰胺层析柱上，以比例为4:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，用同种类聚酰胺薄膜以上述洗脱剂来展开作为配套检测，收集对应于聚酰胺薄膜上Rf=4-5的流份，减压回收溶剂，加入丙酮结晶，分离结晶，洗涤、干燥即得。

上述一种从八角莲中提取鬼臼毒素的方法，所述微波萃取前加入乙醇的浓度为85%,用量为原料质量的18倍量体积。

上述一种从八角莲中提取鬼臼毒素的方法，所述微波萃取功率为500W,萃取3次，每次10分钟。

上述一种从八角莲中提取鬼臼毒素的方法，所述大孔吸附树脂选自D101型、D102型、AB-8型、HPD400、HPD826中的一种。

上述一种从八角莲中提取鬼臼毒素的方法，所述大孔吸附树脂洗脱用乙醇的浓度为60%。

上述一种从八角莲中提取鬼臼毒素的方法，所述大孔吸附树脂洗脱用乙醇的收集量为5倍量柱体积。

上述一种从八角莲中提取鬼臼毒素的方法，所述聚酰胺选自聚酰胺6、聚酰胺66、聚酰胺11、聚酰胺12、聚酰胺610中的一种。

制备所得鬼臼毒素采用下列方法检测。

实施例1HPLC法测定鬼臼毒素纯度

色谱条件色谱柱:十八烷基硅烷键合胶硅胶为填充剂;流动相:甲醇-水(90：10)；流速:1m1/min；检测波长:224nm；柱温:30℃。

测定方法精密称取鬼臼毒素2mg，置于50mL量瓶中，加人甲醇20mL，超声振荡使溶解，甲醇定容至刻度，吸取10uL，注入高效液相色谱仪，采用归一化法测定样品纯度。

采用本发明制备鬼臼毒素，与现有技术相比，本发明所述的方法具有操作简单，溶剂消耗少，生产成本低，工艺稳定，能耗小，污染小,所得产品纯度高(99%)，可适用于实验室和工业化半制备和制备性生产。

具体实施例

以下通过实施例的形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1取八角莲10kg，粉碎，加入其质量15倍量体积的浓度为80%的乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率300W,萃取2次，每次5分钟，合并萃取液，滤过，减压回收乙醇并浓缩，加入到D101型大孔吸附树脂柱上吸附,50%乙醇洗脱，收集3倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，加到聚酰胺（聚酰胺6）层析柱上，以比例为4:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，用同种类聚酰胺薄膜以上述洗脱剂来展开作为配套检测，收集对应于聚酰胺薄膜上Rf=4-5的流份，减压回收溶剂，加入丙酮结晶，分离结晶，洗涤、干燥即得鬼臼毒素1.25g，经HPLC检测，纯度为99.5%。