[发明专利]一种用于结直肠癌大量筛查的生物标记物有效
| 申请号： | 201210356301.9 | 申请日： | 2012-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN102936597A | 公开（公告）日： | 2013-02-20 |
| 发明（设计）人： | 鲁新成;路立婷;廖婉琴;武长杰;邱孙全 | 申请（专利权）人： | 温州医学院 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 温州瓯越专利代理有限公司 33211 | 代理人： | 张瑜生 |
| 地址： | 325000 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 直肠癌 大量 生物 标记 | ||
1.一种用于结直肠癌大量筛查的生物标记物，其特征在于：所述的生物标记物为RSPO2基因。
2.根据权利要求1所述的用于结直肠癌大量筛查的生物标记物，其特征在于：用MSP检测结直肠癌细胞中RSPO2甲基化状态时使用的对RSPO2甲基化状态有特异性的上游引物RSPO2-M1和下游引物RSPO2-M2，引物对的序列如下：
。
3.根据权利要求1或2所述的用于结直肠癌大量筛查的生物标记物，其特征在于：所述的包含RSPO2基因的基因组DNA来源于结直肠癌细胞。
4.一种RSPO2基因甲基化的MSP检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）提取包含RSPO2基因的基因组DNA，用分光光度计检测DNA纯度与含量；
（2）对提取的包含RSPO2基因的基因组DNA用亚硫酸氢钠进行处理修饰；
（3）以步骤（2）中处理修饰后的DNA为模板，设计RSPO2甲基化特异性引物，取RSPO2甲基化特异性引物、DNA聚合酶、PCR反应缓存液、dNTP、去离子水混合，进行PCR扩增，
PCR反应条件为：94℃预变性3 min，94℃ 30 s、退火45 s、72℃ 40 s共37个循环，72℃延伸10 min；
（4）PCR反应结束后，取PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳进行检测；
（5）对检测结果进行分析，对RSPO2甲基化的特异性引物扩增出139 bp条带的PCR产物为甲基化阳性，即存在RSPO2甲基化。
5.根据权利要求4所述的RSPO2基因甲基化的MSP检测方法，其特征在于：所述的步骤（3）中的RSPO2甲基化特异性引物对的序列如下：
。
6.根据权利要求4所述的RSPO2基因甲基化的MSP检测方法，其特征在于：所述的包含RSPO2基因的基因组DNA来源于粪便。
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