[发明专利]一株耐盐耐碱的Cr(VI)还原微生物及其筛选方法

权利要求书

1.一株耐盐耐碱的Cr(VI)还原微生物，其特征在于，它的16S rRNA基因具有SEQ ID No.1所示的基因序列；该耐盐耐碱的Cr(VI)还原微生物保存在中国专利局指定的保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为：CGMCC No.5873。

2.一种权利要求1所述耐盐耐碱的Cr(VI)还原微生物的筛选方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）富集：称取5g铬污染土壤于50mL已灭菌的液体LB培养基中（氯化钠5g L^-1，酵母提取物5g L^-1，胰蛋白胨10g L^-1，pH=7.0～7.5），28℃，160rpm振荡培养；

（2）驯化：当土悬液由原来的黄色变成灰绿色时，取上悬液接种至含Cr(VI)的液体LB培养基中，28℃，160rpm振荡培养，当培养液再次由黄色变成灰绿色时，将其接种至另一含有更高Cr(VI)浓度的液体培养基中，以此逐步提高培养基中的Cr(VI)浓度，从而驯化目的菌株；驯化过程中所用的Cr(VI)以过滤灭菌后的K₂Cr₂O₇母液形式进行添加；驯化所用的Cr(VI)浓度梯度依次为5mM、8mM、10mM、12mM、15mM；

（3）分离：当驯化浓度为15mM Cr(VI)时，经过5d的培养，培养液变成灰绿色，以该菌液作为分离母液，取1mL按梯度稀释成10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7；分别从10^-5、10^-6、10^-7的稀释液中吸取50uL涂布于含7mM Cr(VI)的固体培养基中，28℃倒置培养2～3d；

（4）纯化：分别挑取不同形态的单菌落，于含有7mM Cr(VI)的固体培养基中进行划线接种；28℃倒置培养2～3d后，再次挑取单菌落划线于含铬培养基中；如此纯化3～4代，获得耐盐耐碱的Cr(VI)还原微生物。