[发明专利]一种从白花地胆草中提取白花地胆草平A、B的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药化学领域，涉及一种从白花地胆草中提取白花地胆草平A、B的方法。

背景技术

白花地胆草是中药苦地胆的植物来源，民间认为苦地胆具有清热、凉血、利湿的功效。现代药理研究表明，白花地胆草具有抗菌、抗炎、保肝、抗肿瘤、抗糖尿病、解热和降血压等药理活性。Sim等人对菲律宾产白花地胆草煎剂抑菌实验表明，其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有强烈的体外抑制作用，海南产白花地胆草全草乙醇提取物、水提取物均具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性和抗金黄色葡萄球菌活性。白花地胆草中的活性成分已有大量报道，主要含有倍半萜、黄酮苷、酚酸等。

白花地胆草平A（Tomenphantopin A），分子式为C₂₀H₂₄O₇，分子量为376.41，为无色粉末，具有细胞毒活性，对KB细胞的ED₅₀为2.5μg/mL；白花地胆草平B（Tomenphantopin B），分子式为C₁₉H₂₂O₇，分子量为362.38，为无色针晶，具有细胞毒活性，对KB细胞的ED₅₀为5.0μg/mL。

目前未见有关自天然植物白花地胆草中同时提取制备白花地胆草平A和白花地胆草平B的方法报道和专利申请。

发明内容

本发明的目的是提供一种从白花地胆草中提取白花地胆草平A、B的方法，该方法操作简单、重现性好。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种从白花地胆草中提取白花地胆草平A、B的方法，其特征在于包括以下步骤：

将白花地胆草洗净、阴干、粉碎，然后用70-90%乙醇室温浸泡提取3-4次，每次8-36小时，合并提取液，提取液减压蒸馏回收乙醇，得到的提取物溶于饱和食盐水中，用水饱和正己烷萃取，除去脂溶性成分，水层继续用乙酸乙酯萃取，将得到的乙酸乙酯萃取物用葡聚糖凝胶柱层析进行分离纯化，石油醚-丙酮100:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1梯度洗脱，洗脱液经薄层层析检测，最后经制备液相色谱制备，得到白花地胆草平A、白花地胆草平B。

所述薄层层析检测时展开剂为体积比10:1-30:1的石油醚-丙酮。

所述制备液相分离中，甲醇和水混合溶液是指甲醇和水的体积比为（70-80）:（30-20）。

本发明首次从白花地胆草中分离得到白花地胆草平A和白花地胆草平B，制备方法简单、原料易得、重现性好，为大规模工业化生产提供了可能。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将干燥的白花地胆草全草10kg洗净、阴干、粉碎，室温下用80%乙醇提取3次，每次分别用时30h、24h、12h，将所得提取液减压浓缩回收乙醇，得到的提取物溶于饱和食盐水中，用水饱和正己烷萃取，除去脂溶性成分，水层继续用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至萃取体积的1/20，加入Sephadex LH-20柱进行柱层析，用体积比为100:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1的石油醚-丙酮混合溶液进行洗脱，分别收集洗脱液，然后用TLC薄层检验，展开剂为30:1的石油醚-丙酮，根据Rf值来判断、合并相同或类似部分，采用制备液相色谱分离纯化，流动相为甲醇：水=72:28，流速为3.8ml/min，收集相应组分旋转蒸发浓缩后，得到纯度大于98%的白花地胆草平A765mg、白花地胆草平B973mg。

实施例2：

将干燥的白花地胆草全草10kg洗净、阴干、粉碎，室温下用90%乙醇提取3次，每次分别用时36h、20h、10h，将所得提取液减压浓缩回收乙醇，得到的提取物溶于饱和食盐水中，用水饱和正己烷萃取，除去脂溶性成分，水层继续用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至萃取体积的1/20，加入Sephadex LH-20柱进行柱层析，用体积比为100:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1的石油醚-丙酮混合溶液进行洗脱，分别收集洗脱液，然后用TLC薄层检验，展开剂为10:1的石油醚-丙酮，根据Rf值来判断、合并相同或类似部分，采用制备液相色谱分离纯化，流动相为甲醇：水=76:24，流速为3.6ml/min，收集相应组分旋转蒸发浓缩后，得到纯度大于98%的白花地胆草平A806mg、白花地胆草平B981mg。

实施例3：

将干燥的白花地胆草全草10kg洗净、阴干、粉碎，室温下用70%乙醇提取4次，每次分别用时24h、15h、10h、8h，将所得提取液减压浓缩回收乙醇，得到的提取物溶于饱和食盐水中，用水饱和正己烷萃取，除去脂溶性成分，水层继续用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至萃取体积的1/20，加入Sephadex LH-20柱进行柱层析，用体积比为100:1、20:1、10:1、5:1、3:1、1:1的石油醚-丙酮混合溶液进行洗脱，分别收集洗脱液，然后用TLC薄层检验，展开剂为20:1的石油醚-丙酮，根据Rf值来判断、合并相同或类似部分，采用制备液相色谱分离纯化，流动相为甲醇：水=78:22，流速为3.5ml/min，收集相应组分旋转蒸发浓缩后，得到纯度大于98%的白花地胆草平A793mg、白花地胆草平B978mg。