[发明专利]基于量子点共振能量转移的MGMT活性检测试剂盒及方法

权利要求书

1.基于量子点共振能量转移的MGMT活性检测试剂盒，主要包括：

（1）链霉亲和素修饰的磁性量子点；

（2）四甲基罗丹明标记的抗MGMT抗体耦合物；

（3）生物素标记的O⁶-苄基鸟嘌呤；

（4）缓冲液A，其终浓度组成如下：20mM DTT，2mM EDTA，20%丙三醇，溶剂为100mM Tris-HCl，pH 7.6；

（5）O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶标准品。

2.利用权利要求1所述试剂盒检测O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶活性的方法，所述方法包括：

（1）提取待测样品的总蛋白质；

（2）取10μL上述提取的总蛋白质，溶于50μL的缓冲液A中，然后加入50pmol的生物素标记的O⁶-苄基鸟嘌呤，用纯水补足至300μL，经震荡混匀后，室温下反应90min，然后加入50pmol链霉亲和素修饰的磁性量子点，用缓冲液A补足至300μL，充分振荡混匀反应5min后，然后在磁力作用下，除去上清液，用缓冲溶液A反复洗涤多次，加入50pmol四甲基罗丹明标记的抗MGMT抗体耦合物，用含1%BSA的缓冲液A补足至300μL，充分振荡混匀反应30min，在磁力作用下除去上清液，并用缓冲溶液A反复洗涤多次，最后加入缓冲溶液A 300μL，移至96孔板中，在Wallac 1420酶标仪上测定其在400nm的激发光下、在585nm处的发射光强；

（3）取不同量的O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶溶于50μL缓冲液A中，配制梯度浓度的标准品溶液，分别按照步骤（2）的方法，进行反应，最后在Wallac 1420酶标仪上测定其在400nm的激发光下、在585nm处的发射光强，绘制TMR荧光增强程度-MGMT浓度标准曲线；

（4）根据样品测得的荧光强度值，对照标准曲线，获得样品中的MGMT浓度数据。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述待测样品为临床组织样品或临床细胞株样品。