[发明专利]一种蒲包花苷B的分离制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取分离技术领域，具体地说是一种通过膜分离和制备型高效液相色谱技术分离制备蒲包花苷B的方法。

背景技术

蒲包花苷B为苯丙素苷类化合物，呈无定形粉末状，分子式为C₂₃H₂₆O₁₁，分子量为478.45。分子结构式为：

。

蒲包花苷B主要存在于苦苣苔科、茶茱萸科、木犀科、车前科、蔷薇科及玄参科等多种植物中。现代药理研究表明，蒲包花苷B具有抗脂质过氧化作用，动物实验表明，蒲包花苷对于大鼠肝微粒体中，由ADP+NADPH诱导的脂质过氧化的IC₅₀为0.40μM。

目前尚未见蒲包花苷B工业分离制备方法的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种环保无污染、产品纯度高，可以大规模生产的蒲包花苷B的分离制备方法。

为了达到上述目的，本发明采用技术方案为：

一种蒲包花苷B的分离制备方法，其特征在于：

（1）提取：取富含蒲包花苷B的药材，加入药材重量6-15倍的沸水浸提3次，每次1.5-2.5h，合并浸提液；

（2）大孔树脂柱层析：将浸提液上样于非极性大孔吸附树脂柱，依次用蒸馏水和30-70%乙醇洗脱，收集洗脱液；

（3）膜分离：将洗脱液浓缩回收乙醇，经高速离心机离心得到清液，通过截留分子量5000的超滤膜系统过滤，滤液再经过截留分子量为1000的中空纤维膜分离，得到透过液，浓缩干燥即得到膜分离组分；

（4）制备型高效液相色谱分离：以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以甲醇—水为流动相，梯度洗脱，紫外在线监测，收集目标成分，浓缩冷冻干燥即得蒲包花苷B。

步骤（1）中所述富含蒲包花苷B的药材可以是苦苣苔科植物喜荫花全植物、木犀科植物水蜡树的根或车前地上部分。

步骤（4）中所述甲醇—水流动相中甲醇的体积百分比为30-80%。

其特征在于步骤（4）中所述紫外在线监测波长为215nm。

本发明的有益效果是：本发明采用膜分离技术，提高了产品含量，且能耗低，采用制备液相色谱法分离纯化，分离度高，产品纯度高，能够实现大规模生产。

具体实施方式：

实施例1：

将喜荫花全株粉碎，称取3kg，加入30kg沸水浸提3次，每次1.5h，过滤，合并浸提液，浸提液上样于HPD100型大孔树脂柱，依次用蒸馏水和70%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩回收乙醇，经高速离心机离心得到清液，通过截留分子量5000的超滤膜系统过滤，滤液再经过截留分子量为1000的中空纤维膜分离，得到透过液，浓缩干燥即得到膜分离组分；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以30-80%甲醇—水为流动相，梯度洗脱，取0.5g膜分离组分用10ml无水甲醇溶解，进样，紫外在线监测，波长为215nm，收集目标成分，浓缩冷冻干燥即得蒲包花苷B，含量95.3%（高效液相检测），提率为70.8%。

实施例2：

将水蜡树的根粉碎，称取5kg，加入30kg沸水浸提3次，每次2h，过滤，合并浸提液，浸提液上样于HPD100型大孔树脂柱，依次用蒸馏水和50%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩回收乙醇，经高速离心机离心得到清液，通过截留分子量5000的超滤膜系统过滤，滤液再经过截留分子量为1000的中空纤维膜分离，得到透过液，浓缩干燥即得到膜分离组分；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以30-80%甲醇—水为流动相，梯度洗脱，取1g膜分离组分用20ml无水甲醇溶解，进样，紫外在线监测，波长为215nm，收集目标成分，浓缩冷冻干燥即得蒲包花苷B，含量97.8%（高效液相检测），提率为72.6%。

实施例3：

将车前草地上部分粉碎，称取5kg，加入75kg沸水浸提3次，每次2.5h，过滤，合并浸提液，浸提液上样于HPD100型大孔树脂柱，依次用蒸馏水和30%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，浓缩回收乙醇，经高速离心机离心得到清液，通过截留分子量5000的超滤膜系统过滤，滤液再经过截留分子量为1000的中空纤维膜分离，得到透过液，浓缩干燥即得到膜分离组分；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以30-80%甲醇—水为流动相，梯度洗脱，将0.5g膜分离组分用20ml无水甲醇溶解，进样，紫外在线监测，波长为215nm，收集目标成分，浓缩冷冻干燥即得蒲包花苷B，含量95.3%（高效液相检测），提率为76.4%。