[发明专利]一种A组轮状病毒实时等温扩增检测试剂盒及其引物和探针

权利要求书

1.一种A组轮状病毒检测用引物，其特征在于，包括正向引物F1和反向引物R1，所述正向引物F1和所述反向引物R1的碱基序列表示如下：

正向引物F1：5’-AACATCATGCWACRGTWGGACT-3’；

反向引物R1： 

5’-AATTCTAATACGACTCACTATAGGGCAGATGGTTAGYYTGGTCCTYA-3’。

2.根据权利要求1所述的一种A组轮状病毒检测用引物，其特征在于：所述反向引物R1的5’端的25个碱基是增加的T7噬菌体启动子序列，而3’端22个碱基是与A组轮状病毒VP6基因靶RNA互补的特异性序列，所述正向引物F1和所述反向引物R1的3’端的病毒核酸变异位点使用简并碱基。

3.一条A组轮状病毒检测用分子信标探针，其特征在于，所述分子信标探针的碱基序列表示如下：

分子信标探针P1：

5’-FAM-CGATCGTATGCNRTACCRGTTGGACCCGATCG-DABCYL-3’，

所述分子信标探针P1在其寡核苷酸DNA分子的5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团DABCYL。

4.根据权利要求3所述的一条A组轮状病毒检测用分子信标探针，其特征在于：所述分子信标探针P1的5’端和3’端的6个碱基是形成探针特征性发夹结构茎端区的反向互补序列，探针分子中间的20个碱基是与A组轮状病毒VP6基因互补的特异性序列，其中病毒核酸变异位点使用简并碱基。

5.一种A组轮状病毒实时等温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒至少包括2×实时NASBA反应液和5×酶混合液，所述2×实时NASBA反应液包含有如权利要求1所述的正向引物F1和反向引物R1以及如权利要求3所述的分子信标探针P1。

6.根据权利要求5所述的一种A组轮状病毒实时等温扩增检测试剂盒，其特征在于，所述2×实时NASBA反应液包括如下组分：

7.根据权利要求5所述的一种A组轮状病毒实时等温扩增检测试剂盒，其特征在于，所述5×酶混合液包括如下组分：  

8.根据权利要求5所述的一种A组轮状病毒实时等温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括阳性对照、阴性对照和空白对照。

9.根据权利要求8所述的一种A组轮状病毒实时等温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为A组轮状病毒体外转录的VP6基因RNA片段。

10.根据权利要求8所述的一种A组轮状病毒实时等温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述阴性对照为在核酸提取时与标本同时平行提取无菌生理盐水，所述空白对照为无核酸酶的超纯水。