[发明专利]一种高效表达枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶的方法

权利要求书

1.一种重组表达载体pMA5-ansZ，其特征是：

通过PCR技术获得来源于B.subtilis 6-7的ansZ基因，与克隆载体pMD18-T相连，获得该基因的大量克隆，经双酶切，片段纯化后与表达载体pMA5连接，获得重组质粒pMA5-ansZ。

2.重组质粒pMA5-ansZ转化B.subtilis 168

采用改进的Spizizen法将重组质粒pMA5-ansZ转化B.subtilis168，挑取阳性菌落，酶切验证，得到pMA5-ansZ/B.subtilis 168。

3.L-天冬酰胺酶活力检测

将pMA5-ansZ/B.subtilis 168接种于枯草芽孢杆菌发酵培养基中过夜培养，于10000r/min、4℃离心10min，上清液为胞外粗酶液，细胞破碎上清液为胞内粗酶液，采用氨气敏电极检测L-天冬酰胺酶酶活，经检测重组菌酶活为22.4U/mL，较出发菌约提高574倍。