[发明专利]提高骨髓单个核细胞心肌细胞保护及迁移能力的处理方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种提高骨髓单个核细胞心肌细胞保护能力及迁移能力的预处理方法，可提高其移植治疗急性心肌梗死的疗效。

（二）背景技术

目前充血性心力衰竭发病率逐年升高，全球有1500万受累者，在美国有500万患者，每年新发病例为46.5万，是65岁上人群的首位住院原因，也是心血管死亡的最主要原因。细胞移植疗法可促进梗死局部血管新生和心肌再生而改善心肌梗死后心功能，已成为目前心血管领域的研究热点。骨髓单个核干细胞（BMMNCs）是具多分化方向能力的成体干细胞，进行自体移植无排异及来源的限制，也不涉及伦理问题，是细胞移植治疗的理想细胞来源。大量的基础研究和初步的临床试验已显示了骨髓单个核细胞移植治疗缺血性心肌病的安全性和可行性。然而随着研究的深入，发现干细胞移植治疗心力衰竭仍存在一些问题，主要是移植疗效不够理想。因此，提高移植疗效是目前干细胞移植领域亟待解决的问题。

作为临床应用，经静脉或冠脉注射移植细胞，细胞迁移至局部受损组织是干细胞修复损伤组织的第一步也是最关键的一步。动物研究表明经静脉注射干细胞尽管能迁移到局部损伤区域，但迁移至局部损伤的细胞数量是不充分的，它严重制约着干细胞修复梗死心肌的能力，也是导致移植疗效不够理想的主要原因之一。因此提高骨髓干细胞的迁移能力及心肌细胞保护能力是确保移植疗效的关键，将有助于提高干细胞移植疗法在临床应用中的价值。

（三）发明内容

本发明目的是提供一种提高骨髓单个核细胞心肌细胞保护能力及迁移能力的预处理方法，从而提高其移植治疗急性心肌梗死的疗效。

本发明采用的技术方案是：

一种提高骨髓单个核细胞迁移能力及心肌细胞保护能力的预处理方法，所述方法为：将新鲜分离的骨髓单个核细胞先以Valsartan溶液培养30分钟，再以Angiotensin II溶液培养2小时，得到处理后的骨髓单个核细胞用于移植治疗急性心肌梗死；所述Valsartan溶液中Valsartan终浓度为0.5~2μmol/L，溶剂为低糖DMEM培养基；所述Angiotensin II溶液中Angiotensin II终浓度为50~150nmol/L，溶剂为低糖DMEM培养基。

AngiotensinII为非特异性血管紧张素受体激动剂，可同时激活血管紧张素1型受体（AT1R）和血管紧张素2型受体（AT2R），是美国Sigma Aldrich公司生产的化学试剂（分子式：C₅₀H₇₁N₁₃O₁₂；分子量1046.18；产品号：A9525）。

Valsartan是特异性血管紧张素1型受体（AT1R）激动剂，由北京诺华制药公司提供（分子式：C₂₄H₂₉N₅O₃；分子量435.5）。终浓度为1μmol/L，溶剂为低糖DMEM培养基。

所述培养均在常规条件下进行，具体于37℃下，在CO₂体积浓度5%、空气体积浓度95%的混合气体中进行。

优选的，所述Valsartan溶液中Valsartan终浓度为1μmol/L。

优选的，所述Angiotensin II溶液中Angiotensin II终浓度为100nmol/L。

本发明的有益效果主要体现在：通过预处理间接激活骨髓单个核细胞血管紧张素2型受体 AT2R激活的骨髓单个核细胞分泌一氧化氮增加，迁移能力及心肌细胞保护能力增强，一定程度上可提高其移植治疗急性心肌梗死的疗效。

（四）附图说明

图1 为利用transwell技术比较未处理骨髓单个核细胞（A）、CGP42112A预处理骨髓单个核细胞（C）、AngiotensinII与Valsartan联合预处理骨髓单个核细胞（B）的体外迁移能力，标尺为100μm；

图2 为利用共培养技术比较未处理骨髓单个核细胞（B）、CGP42112A预处理骨髓单个核细胞（D）、AngiotensinII与Valsartan联合预处理骨髓单个核细胞（C）的体外心肌细胞保护能力，标尺为100μm；箭头所指为凋亡心肌细胞；图A为缺氧缺血清直接诱导心肌细胞凋亡，作为阳性对照；