[发明专利]一种猪O型口蹄疫病毒重组杆状病毒及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术和病毒学领域。更具体地，本发明涉及一种猪O型口蹄疫病毒的重组杆状病毒QP-Ac-FVLP，还涉及一种猪O型口蹄疫病毒的重组杆状病毒QP-Ac-FVLP的制备方法，还涉及一种猪O型口蹄疫病毒的重组杆状病毒QP-Ac-FVLP在制备预防猪O型口蹄疫病毒感染亚单位疫苗中的应用。利用本发明的重组病毒表达人工修饰的猪口蹄疫病毒O型VP0、VP1和VP3基因并组装成猪口蹄疫病毒样病毒颗粒VLP，可以用于制备O型口蹄疫病毒安全疫苗。

背景技术

口蹄疫（Foot and Mouth Disease，FMD）是一种由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Dis ease Virus，FMDV）引起偶蹄动物的急性、热性、高度接触性人畜共患的传染病。该病流行历史较久，宿主范围广，传染性极强，传播途径多、速度快（陈溥言，2006），一旦爆发极易造成大流行从而严重降低发病动物生产机能和畜产品质量，给畜牧业造成巨大经济损失，所以世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类烈性动物传染病(Pereira HG,1981;Mark et al.,1999)，我国农业部将其列为一级动物传染病，一旦发生疫情必须上报。其宿主主要为偶蹄类动物如家畜牛、猪、羊及骆驼、鹿等其他野生动物（Doel,2005;Dus Santos et al.，2005）。而相关研究表明猫、狗、鸟类、啮齿类、蝙蝠、昆虫等都可传播本病。O型口蹄疫在我国根深蒂固、由来已久。2009年以前分离的FMDV毒株多为中国拓扑型，而2010年后我国口蹄疫的流行趋势发生了新的变化，主要以O型FMDV耿马毒株即东南亚拓扑型的缅甸98（MYA98）为主。FMDV属于小RNA病毒科（Picornaviridae），口蹄疫病毒属（Aphthovirus），该病毒为单股正链小RNA病毒，基因组长约8500个核苷酸，主要由结构基因（P1区）和非结构基因（P2、P3区）等构成。P1区编码FMDV的4种结构蛋白分别为VP4,VP0,VP3和VP1，其中仅有VP0,VP3和VP1蛋白可以形成病毒样颗粒。这四种结构蛋白形成五聚体的亚单位构成病毒衣壳，避免病毒RNA被核酸酶降解，决定病毒的宿主范围和抗原性并且能识别特异性细胞受体。

口蹄疫疫苗接种是作为特异性预防口蹄疫的可靠工具和有效手段（Casas et al.,1988）。目前抗FMDV疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗这两种常规疫苗，虽然这两种疫苗在口蹄疫防制中发挥一定作用，但是存在一些缺点。弱毒苗因为容易导致免疫动物产生病毒血症和长期带毒，还潜在毒力返强的风险，所以世界只有少数国家和地区研究使用，而灭活疫苗具有安全可靠和免疫效果良好的特点，大部分国家使用灭活疫苗来预防口蹄疫。然而，灭活疫苗因其自身的原因，也存在不少缺陷：1.免疫动物无交叉保护，因此一种灭活疫苗无法提供全面的保护；2.制备过程中存在病毒逃逸的风险；3.因含有组织或细胞成分免疫存在副反应。

除了上述常规疫苗之外，人们正在寻求口蹄疫基因工程疫苗如亚单位疫苗，多肽疫苗，痘病毒、腺病毒等活载体疫苗。但是这些疫苗仍存在某些不足，不被人们所接受，如亚单位疫苗和多肽疫苗造价昂贵，免疫效果不佳；痘病毒、腺病毒等活载体的疫苗虽然具有一定的免疫效果，但由于载体病毒的限制性，人们宁可选择常规疫苗也不选择该基因工程疫苗来预防口蹄疫。因此，本领域迫切需要开发出具有高效、安全、廉价的针对口蹄疫的基因工程疫苗。