[发明专利]一种人血液HSP70抗体胶体金标检测试纸条及其制备方法无效
申请号: | 201210365239.X | 申请日: | 2012-09-26 |
公开(公告)号: | CN102879584A | 公开(公告)日: | 2013-01-16 |
发明(设计)人: | 钱令嘉;弓景波;王新兴;战锐;杲修杰 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 |
主分类号: | G01N33/68 | 分类号: | G01N33/68;G01N33/531 |
代理公司: | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人: | 陈波 |
地址: | 100850*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 血液 hsp70 抗体 胶体 检测 试纸 及其 制备 方法 | ||
1.一种人血液HSP70抗体胶体金标检测试纸条,其特征在于:包括设在固定板(1)上依次相连的样品垫(2)、金标垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(9);在硝酸纤维素膜(4)上设有三条平行的第一检测线抗原(5)、第二检测线抗原(6)、第三检测线抗原(7)和一条质控线抗体(8);在金标垫(3)上设有金标抗原。
2.根据权利要求1所述的人血液HSP70抗体胶体金标检测试纸条,其特征在于:所述固定板(1)为具有压敏胶的PVC板材,样品垫(2)为玻璃纤维膜,金标垫(3)为聚酯纤维膜。
3.根据权利要求1所述的人血液HSP70抗体胶体金标检测试纸条,其特征在于:所述金标抗原为显色抗原,检测线抗原为捕捉抗原,显色抗原与捕捉抗原能同时和人HSP70抗体结合形成双抗原夹心;显色抗原和捕获抗原为原核重组表达的人HSP70蛋白。
4.根据权利要求1所述的人血液HSP70抗体胶体金标检测试纸条,其特征在于:所述金标抗原用粒径为20nm-60nm的胶体金标记。
5.根据权利要求1所述的人血液HSP70抗体胶体金标检测试纸条,其特征在于:所述质控线抗体为兔抗人HSP70多克隆抗体。
6.一种权利要求1所述的人血液HSP70抗体胶体金标检测试纸条的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)用常规的柠檬酸三钠还原法制备均匀粒径为20nm-60nm的胶体金;
(2)调节胶体金pH为8.5-9,然后加入显色抗原与其反应,其中显色抗原的浓度为0.02mg/ml,离心得沉淀,重悬沉淀,得金标抗原溶液,将金标抗原溶液喷印在聚酯纤维膜,晾干;
(3)将捕捉抗原用稀释液稀释成浓度为1mg/ml的捕捉抗原溶液,用喷墨仪将捕捉抗原溶液在硝酸纤维素膜上喷划三条平行检测线,真空干燥;
(4)将兔抗人HSP70多克隆抗体用稀释液稀释成浓度为0.5mg/ml的兔抗人HSP70多克隆抗体溶液,用喷膜仪将抗体喷线在硝酸纤维素膜上形成质控线,真空干燥;
(5)按样品垫、金标垫、硝酸纤维膜、吸水纸顺序粘贴在固定板上,切条,装入塑料袋,干燥包装。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,离心的方法为:反应液于5000xg离心30min,沉淀用1wt% 牛血清白蛋白溶液重悬浮,反复2次;其中1wt% 牛血清白蛋白溶液为10mM 的Tris-HCl 缓冲溶液,pH为8.5,含1wt%的牛血清白蛋白。
8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中重悬沉淀的溶液为:20mM 的Tris-HCl缓冲溶液,pH为8.5,含30wt%的海藻糖,1wt% 的牛血清白蛋白,1wt %的酪蛋白,体积浓度为0.01%的 Tween-20,0.02 wt % 的NaN3。
9.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述稀释液为10mM 的磷酸盐缓冲溶液,pH为7.6,其中含10wt%的海藻糖,体积浓度为3%的甲醇。
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