[发明专利]检测β-兴奋剂类药物的五联检测卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及β-肾上腺素受体激动剂检测技术领域，特别是涉及一种克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、苯乙醇胺A和特布他林五联检测卡及其制备方法。 

背景技术

随着畜牧业规模化、商业化的发展，兽药和饲料添加剂在畜牧业生产中得到了广泛的应用，兽药广泛使用于各种疾病的有效控制，降低了动物死亡率；提高饲料转化率，提高了动物增重率和缩短了动物饲养周期，改善皮革质量，降低禁食胴体和动物组织废弃率；促进了动物源性产品产量的增长和动物集约化养殖的发展。现在的兽药不仅用来防治动物疾病，而且越来越多的药物用于促进生长，同步发情等非治疗用途，造成了更加严重的兽药残留问题。 

近几年食品安全问题不断升级，“瘦肉精”在食用动物饲料中的滥用受到人们越来越高的重视，因为该兴奋剂残留于食品基质中，通过食物链进入人体后，会对人体健康造成极大的危害。 

“瘦肉精”是一类动物用药的统称。它作为一类化学用品，而不是一种特定的物质，是指能够促进瘦肉生长的药物添加剂。任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。目前，能够实现这种功能的物质是一类叫做β-兴奋剂（β-agonist）的药物，比如在中国造成中毒的克伦特罗（clenbuterol）和美国允许使用的莱克多巴胺（Ractopamine），其他类似药物还有沙丁胺醇（Salbutamol）和特布他林(Terbutaline)等，以及去年饲料中从未出现过的苯乙醇胺A，这种瘦肉精新品种的出现，再次敲响了我国食品安全警钟。 

目前对于常见的β-兴奋剂克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、苯乙醇胺A和特布他林的检测主要有酶联免疫(ELISA)、气相色谱-质谱法(GC-MC)、高效液相色谱法(HPLC)等检测方法，但这些方法需要的设备昂贵，操作复杂，难于推广。因而有必要建立一种简便快捷、可靠，并且能同时检测这五种物质的检测方法，监控动物源性食品中的兽药残留，确保动物源性食品的安全。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种能同时检测克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、苯乙醇胺A和特布他林的检测卡，适合企业进行现场检测且快捷简便、成本低廉、结果准确的检测方法。 

本发明的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、苯乙醇胺A和特布他林五联胶体金检测卡，由包被了克伦特罗单克隆抗体、莱克多巴胺单克隆抗体、沙丁胺醇单克隆抗体、苯乙醇胺A单克隆抗体和特布他林单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、苯乙醇胺A和特布他林共5种蛋白质偶联物和兔抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、PVC胶板及塑料模具等组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。 

本发明的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、苯乙醇胺A和特布他林五联胶体金检测卡的制备方法，是由以下步骤实现： 

(1)胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入质量浓度为1%氯金酸（HAuCl₄·3H₂O）5 mL，配制成500 mL质量浓度为 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入质量浓度为1%柠檬酸三钠（Na₃C₆H₅O₇·2H₂O）溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；

(2)抗体的预处理：将要标记的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、苯乙醇胺A和特布他林单克隆抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS 稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS 将要标记的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、苯乙醇胺A和特布他林单克隆抗体稀释成1 mg/mL，过0.22 μm滤膜；