[发明专利]一种制备荛花酯D的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种采用超临界CO₂萃取和高速逆流色谱分离技术制备荛花酯D的方法。

背景技术

荛花酯D（Wikstroelide D）为二萜类化合物，分子式C₅₂H₈₀O₁₁，分子量881.2。荛花酯D在天然植物中广泛存在，主要从瑞香料植物微凹荛花Wikstroemia retusa A.Gray 树皮中分离得到。药理研究表明，荛花酯D具有细胞毒活性，在MTT测试中，对P388和人肺癌株PC-6呈细胞毒活性。

目前，国内尚未见大量制备荛花酯D的方法报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备荛花酯D的方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种制备荛花酯D的方法，其特征在于包括以下步骤：取微凹荛花树皮粉碎，控制粒径为40-80目，加入萃取釜中，以体积百分比为90-100%的乙醇水溶液为夹带剂，采用超临界CO₂萃取，收集萃取液，回收乙醇后用庚烷脱脂，再以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，采用高速逆流色谱分离，流分减压干燥即得荛花酯D。

所述粉碎粒径为40目，乙醇水溶液体积百分比为95%。

所述超临界CO₂萃取条件为：萃取温度为42-55℃，萃取压力为25-30MPa，分离釜Ⅰ温度为35-45℃，压力为8-10MPa，分离釜Ⅱ温度为28-38℃，压力为6-7MPa，夹带剂用量为原料的1-2倍量，萃取时间为2-4小时，CO₂流量为18-22L/h。

所述正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统比例为（1-3）：（4-6）：（2-4）：（2-4），色谱仪转速为800-900rpm。

本发明优势在于：工艺采用超临界CO₂萃取和高速逆流色谱分离荛花酯D，分离过程无产品损失，制备周期短，试剂可以回收再利用，制备量大，无污染，克服了传统柱层析分离过程中样品死吸附、工艺繁琐、重现性差等技术缺陷。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

实施例1：

取微凹荛花树皮粉碎过40目，取1kg原料加入超临界CO₂萃取釜中，开启设备，调整设备参数：萃取温度为55℃，萃取压力为30MPa，分离釜Ⅰ温度为45℃，压力为9MPa，分离釜Ⅱ温度为35℃，压力为7MPa，通入CO₂流体，达到上述参数后，以CO₂液体20L/h流速萃取，并加入夹带95%乙醇水溶液1.2L，动态萃取4h，收集萃取液，回收乙醇，加庚烷脱脂，得到粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，按比例为1:5:3:3混合，取上相泵入分离柱，直至分离柱被固定相灌满，转速为850rpm，同时将下相以6ml/min的流速泵入，待流动相从出液端流出且两相建立动态平衡后，流动相流速调节为2.0ml/min，注入流动相溶解的粗提物，紫外检测器监测，监测波长为231nm，收集荛花酯D流分，连续分离，合并流分减压干燥得荛花酯D，高效液相检测，含量94.0%。

实施例2：

取微凹荛花树皮粉碎过40目，取1kg原料加入超临界CO₂萃取釜中，开启设备，调整设备参数：萃取温度为42℃，萃取压力为28MPa，分离釜Ⅰ温度为40℃，压力为10MPa，分离釜Ⅱ温度为32℃，压力为6.5MPa，通入CO₂流体，达到上述参数后，以CO₂液体18L/h流速萃取，并夹带95%乙醇水溶液1.8L，动态萃取3h，收集萃取液，回收乙醇，加庚烷脱脂，得到粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，按比例为3:6:4:4混合，取上相泵入分离柱，直至分离柱被固定相灌满，转速为800rpm，同时将下相以10ml/min的流速泵入，待流动相从出液端流出且两相建立动态平衡后，流动相流速调节为3.0ml/min，注入流动相溶解的粗提物，紫外检测器监测，监测波长为231nm，收集荛花酯D流分，连续分离，合并流分减压干燥得荛花酯D，高效液相检测，含量91.5%。

实施例3：