[发明专利]小鼠肝脏羧酸酯酶基因克隆表达

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域。

背景技术

羧酸酯酶(Carboxylesterase，EC 3.1.1.1) 属于B-酯酶，能够催化水解含羧酸酯基的脂肪族和芳烃类有机化合物。羧酸酯酶在生物界分布极广，从古细菌和真细菌、至真核微生物、昆虫乃至哺乳动物的各种组织均有活性较高的羧酸酯酶，尤其肝脏中的酶活性最高。羧酸酯酶可以催化酯水解、酯合成、酯交换等具有重要应用价值的反应，由于羧酸酯酶在食品、染料、皮革、纸张等工业中有多样的应用，因此羧酸酯酶在生物技术领域扮演着极其重要的角色。此外还被应用于制药、染料、杀虫剂和杀菌剂等工农业废水中含羧酸酯基类毒性污染物的降解。

目前已经从人、微生物及昆虫中克隆到羧酸酯酶基因，其中从无色杆菌（Achromobacter pichaudii）得到259aa的酶，其最高酶活为0.7U/ml；从嗜热脂肪地芽胞杆菌（Geabacillusstearotheromphilus）得到29KDa的酶，其最高酶活为700U/ml；从嗜热圆锥网团菌（Dictyoglomus turgidum）得到45KDa的酶，其最高酶活为80U/mg；从棉铃虫（Helicoverpa armigera）得到100KDa的酶，其最高酶活为0.32mmol/100ul；从抗性蚊虫（Culex quinquefasciatus）得到60KDa的酶，其最高酶活为135U/mg。此外从斜纹夜蛾（Spodoptera litura）、铅青链霉菌（Deduc Streptomyces lividans）、野山蚕（Bombyx momdarina M）、铜绿蝇（Lucilia cuprina）、稻褐飞虱（Nilaparvata lugens）、大鼠（rat）以及人胎脑等来源均克隆得到相应的羧酸酯酶。

然而，至今从小鼠肝脏中克隆获得的羧酸酯酶报道很少，国外对其的研究应用还很少（13篇研究论文，NCBI PUBMID数据库检索），国内至今未见研究报道。

发明内容

本发明的目的是：提供一种小鼠肝脏羧酸酯酶基因克隆表达，它运用基因克隆技术，成功克隆到小鼠肝脏羧酸酯酶（Mces1f）基因，与表达载体PET-32a连接后在大肠杆菌BL21中进行了该基因的高效表达。而小鼠肝脏羧酸酯酶（Mces1f）基因对呋喃丹、西维因、甲基对硫磷、联苯菊酯等农药有降解作用。

本发明的表达是：

1.以小鼠肝脏总RNA为模板，通过RT-PCR技术扩增了末端含有EcoR I和Xho I酶切位点的DNA片段，对其进行了亚克隆及测序，用软件Vector NTI对所测定序列与对应的NCBI序列（GenBank：BC013479.1）进行比对分析，确定该基因为Mces1f。

EcoR I 起始密码子