[发明专利]抗副猪嗜血杆菌外膜蛋白OMP5的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及一种抗副猪嗜血杆菌外膜蛋白OMP5的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

副猪嗜血杆菌（Haemophilus Parasuis，HPS）属于巴斯德菌科，嗜血杆菌属，是一种没有运动性、小型、NAD依赖、多形态的革兰氏阴性杆菌。HPS是一种常在菌，通常定植在猪的上呼吸道，并常常可在鼻腔内、扁桃体内和气管前段分离到，而不见其引起任何临床症状。HPS也是猪格拉泽氏病（Glasser’s diseas）的病原。在一定条件下，HPS可造成以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎为特征的全身感染。格拉泽氏病已在全球范围内成为影响猪业的主要细菌性疾病，给养猪业带来巨大损失。迄今已发现的HPS至少有15种不同的血清型，不同血清型菌株之间缺乏有效的交叉免疫保护性，这增加了预防格拉泽氏病的难度。因此，及时、准确、快捷而方便的病原学诊断方法对于猪格拉泽氏病的防治具有重要意义。

目前国内对副猪嗜血杆菌的诊断主要有传统的病原分离，生化鉴定和血清学等方法，以及基于PCR的检测方法等。免疫学方法如ELISA、胶体金试纸条等具有特异性强、灵敏度高、操作简单、快速、对仪器依赖性低等特点，因而常被用于疾病病原检测以及药物痕量分析等领域。目前国内尚未有基于抗体的HPS检测的可商品化诊断方法。

HPS 的外膜蛋白(Outer member protein，OMP)是其主要毒力因子之一，而且免疫原性强。OMP5是其中主要的一种，各血清型HPS菌株都有OMP5。因此OMP5可作为HPS的特异性诊断靶位。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分泌抗副猪嗜血杆菌外膜蛋白OMP5单克隆抗体的杂交瘤细胞株HPS 8D9，已于2012年9月25日保藏于中国典型培养物保藏中心（CHINA CENTER FOR TYPE CULTURE COLLECTION），保藏编号为CCTCC C2012135。

本发明还提供了由上述保藏编号为CCTCC C2012135的杂交瘤细胞株制备的单克隆抗体。

本发明还提供了上述单克隆抗体在检测副猪嗜血杆菌外膜蛋白OMP5上的应用。

本发明所采用的技术方案是：

一种分泌抗副猪嗜血杆菌外膜蛋白OMP5单克隆抗体的杂交瘤细胞株HPS 8D9，于2012年9月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC C2012135。

一种抗副猪嗜血杆菌外膜蛋白OMP5的单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC C2012135的杂交瘤细胞株产生。

所述单克隆抗体为IgG2b亚类。

一种检测副猪嗜血杆菌抗体的试剂盒，含有保藏编号为CCTCC C2012135的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。

一种检测副猪嗜血杆菌的试剂盒，含有保藏编号为CCTCC C2012135的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。

本发明的有益效果在于：

本发明制备得到的单克隆抗体具有以下优点：

（1）特异性好，与猪大肠杆菌、猪巴氏杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌和猪波氏杆菌均无交叉反应；

（2）效价高，纯化后的ELISA抗体效价可达1：204800；

（3）通用性强，对不同血清型副猪嗜血杆菌都能检测；

（4）可大量生产；

（5）可广泛用于副猪嗜血杆菌病的病原学诊断、血清学检测、免疫学检测及防治等。

附图说明

图1为本发明的技术流程图；

图2为单克隆抗体的特异性检测结果（M：蛋白Marke；P5：OMP5；1：猪大肠杆菌；2：猪链球菌2型菌株；3：猪多杀性巴氏杆菌菌株A；4：猪多杀性巴氏杆菌菌株B；5：猪胸膜肺炎放线杆菌菌株；6：猪波氏杆菌菌株）；

图3为单克隆抗体的通用性检测结果（M：蛋白Marker；P5：OMP₅；1：1型HPS；2：3型HPS；3：4型HPS；4：5型HPS；5：10型HPS；6：11型HPS；7：12型HPS；8：14型HPS；9：15型HPS；10：:未定血清型HPS）；

图4为单克隆抗体用于检测HPS在PK15细胞上的粘附（激光共聚焦显微镜观察）（A：单克隆抗体HPS8D9；B：抗OMP5阳性血清对照； C：抗5型HPS全菌阳性血清对照； D：阴性血清对照）。

具体实施方式