[发明专利]一种产果糖基转移酶的菌株及其制备方法

权利要求书

1.一种产果糖基转移酶的菌株，其特征在于：名称为米曲霉scut209（Aspergillus oryzae scut209），保藏于位于中国武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2012年4月10日，保藏编号为CCTCC NO:M2012106。

2.权利要求1所述的产果糖基转移酶的菌株的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

（1）将出发菌株的孢子置于距离30w紫外灯25cm处，照射10min，红光下涂布于含质量百分比1.0%LiCl的PDA平板，30℃下培养2天，通过果糖基转移酶酶活力筛选比出发菌株活力高的菌株；

（2）收集步骤（1）筛选得到的果糖基转移酶酶活力最高的6株菌株任意的孢子，分别制备得到原生质体；然后将6株菌株的原生质体分为两组，每组含3株菌株；将两组原生质体分别于80℃下热灭活10min和30W紫外灯下25cm处灭活10min；然后按照体积比1:1的比例混合；于30℃，在原生质体融合溶液的介导下原生质体融合5min后，用渗透压稳定剂稀释，将稀释液涂布于再生培养基，30℃下避光培养2d；将再生培养基平板上的再生单菌落分别接种于斜面培养基，30℃下培养，得到再生菌株孢子；

（3）将步骤（3）得到的再生菌株孢子接种于发酵培养基中，28～30℃、150～200r/min培养2～天，通过检测果糖基转移酶酶活力进行筛选，得到F1代；

（4）将F1的果糖基转移酶酶活力最高的6株菌株任意的孢子，重复步骤（2）～（4），重复3次，得到产果糖基转移酶的菌株。

3.根据权利要求2所述的产果糖基转移酶的菌株的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的出发菌株的孢子的浓度为10⁵～10⁷个/mL。

4.根据权利要求2所述的产果糖基转移酶的菌株的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的原生质体的制备步骤为：收集生长旺盛，孢子呈灰黑色的孢子，将其浓度调整为10⁵～10⁷个/mL；采用25mmol/Lβ-巯基乙醇+5mmol/LEDTA-2Na的溶液体系处理20min，离心；用无菌水洗涤离心收集的孢子，在0.6mol/L、pH7.0的山梨醇溶液+质量体积比2.5%溶菌酶+质量体积比2.0%蜗牛酶+质量体积比1.5%纤维素酶组成的复合酶体系中，于35～37℃下进行酶解4～6h，制得原生质体。

5.根据权利要求2所述的产果糖基转移酶的菌株的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的原生质体融合溶液的组成为：质量百分比30%的聚乙二醇6000、0.01mol/LCaCl₂和0.02mol/L MgCl₂。

6.根据权利要求2所述的产果糖基转移酶的菌株的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的渗透压稳定剂为0.6mol/L、pH7.0的山梨醇溶液。

7.根据权利要求2所述的产果糖基转移酶的菌株的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的再生培养基的组成为：质量百分比3.0%的白砂糖、质量百分比3.6%的营养肉汤和质量百分比2.0%琼脂。

8.根据权利要求2所述的产果糖基转移酶的菌株的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述的发酵培养基的组成为：质量百分比5.0%的白砂糖、质量百分比的豆粕粉、质量百分比0.3%的玉米粉和水。