[发明专利]PiggyBac转座子介导的肌肉特异表达A-FABP通用载体构建有效
| 申请号： | 201210375051.3 | 申请日： | 2012-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN102876700A | 公开（公告）日： | 2013-01-16 |
| 发明（设计）人： | 昝林森;杨宁;成功;王洪宝 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/65 | 分类号： | C12N15/65;C12N15/63;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 李郑建 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | piggybac 座子 肌肉 特异 表达 fabp 通用 载体 构建 | ||
1.一种PiggyBac转座子介导的肌肉特异表达A-FABP通用载体的构建方法，其特征在于，通过全基因合成PiggyBac转座子载体转座所发生转座必需的PB5'碱基序列和PB3'碱基序列，并在两序列中间引入多克隆位点FseI、MluI、PacI、NotI、HindIII、BamHI、BstBI和AscI；在商业化质粒pSP72基础上完成PiggyBac转座子骨架载体构建；再将LoxP锚定的新霉素抗性基因（Neomycine/NEO）和绿色荧光蛋白基因（EGFP）以及α-肌动蛋白启动子（α-actin promoter）和牛A-FABP基因克隆到多克隆位点FseI、MluI、PacI、NotI、HindIII、BamHI、BstBI和AscI中，最终构建完成PiggyBac-NEO-EGFP-actin-AFABP通用型表达载体。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PB5’端和PB3’端碱基序列为：
PB5’端碱基序列：
CCCTAGAAAGATAGTCTGCGTAAAATTGACGCATGCATTCTTGAA
ATATTGCTCTCTCTTTCTAAATAGCGCGAATCCGTCGCTGTGCATTTAGG
ACATCTCAGTCGCCGCTTGGAGCTCCCGTGAGGCGTGCTTGTCAATGC
GGTAAGTGTCACTGATTTTGAACTATAACGACCGCGTGAGTCAAAATG
ACGCATGATTATCTTTTACGTGACTTTTAAGATTTAACTCATACGATAATT
ATATTGTTATTTCATGTTCTACTTACGTGATAACTTATTATATATATATTTTC
TTGTTATAGATATCGTGACTAATATATAATAAAATGGGTAGTTCTTTAGAC
GATGAGCATATCCTCTCTGCTCTTCTGCAAAGCGATGACGAGCTTGTTG
GTGAGGATTCTGACAGTGAAATATCAGATCACGTAAGTGAAGATGACG
TCCAGAGCGATACAGAAGAAGCGTTTATAGATGAGGTACATGAAGTGC
AGCCAACGTCAAGCGGTAGTGAAATATTAGACGAACAAAATGTTATTG
AACAACCAGGTTCTTCATTGGCTTCTAACAGAATCTTGACCTTGCCACA
GAGGACTATTAGAGGTAAGAATAAACATTGTTGGTCAACTTCAAAGTC
CACGAGGCGTAGCCGAGTCTCTGCACTGAACATTGTCAGAT；
PB3’端碱基序列：
CCCTAGAAAGATAATCATATTGTGACGTACGTTAAAGATAATCATG
CGTAAAATTGACGCATGTGTTTTATCGGTCTGTATATCGAGGTTTATTTAT
TAATTTGAATAGATATTAAGTTTTATTATATTTACACTTACATACTAATAAT
AAATTCAACAAACAATTTATTTATGTTTATTTATTTATTAAAAAAAAACA
AAAACTCAAAATTTCTTCTATAAAGTAACAAAACTTTTAAACATTCTCT
CTTTTACAAAAATAAACTTATTTTGTACTTTAAAAACAGTCATGTTGTAT
TATAAAATAAGTAATTAGCTTAACTTATACATAATAGAAACAAATTATAC
TTATTAGTCAGTCAGAAACAACTTTGGCACATATCAATATTATGCTCTCG
ACAAATAACTTTTTTGCATTTTTTGCACGATGCATTTGCCTTTCGCCTTA
TTTTAGAGGGGCAGTAAGTACAGTAAGTACGTTTTTTCATTACTGGCTC
TTCAGTACTGTCATCTGATGTACCAGGCACTTCATTTGGCAAAATATTAG
AGATATTATCGCGCAAATATCTCTTCAAAGTAGGAGCTTCTAAACGCTT
ACGCATAAACGATGACGTCAGGCTCATGTAAAGGTTTCTCATAAATTTT
TTGCGACTTTGAACCTTTTCTCCCTTGCTACTGACATTATGGCTGTATAT
AATAAAAGAATTTATGCAGGCAATGTTTATCATTCCGTACAATAATGCCA
TAGGCCACCTATTCGTCTTCCTACTGCAGGTCATCACAGAACACATTTG
GTCTAGCGTGTCCACTCCGCCTTTAGTTTGATTATAATACATAACCATTT
GCGGTTTACCGGTACTTTCGTTGATAGAAGCATCCTCATCACAAGATGA
TAATAAGTATACCATCTTAGCTGGCTTCGGTTTATATGAGACGAGAGTAA
GGGGTCCGTCAAAACAAAACATCGATGTTCCCACTGGCCTGGAGCGAC
TGTT。
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