[发明专利]一种miR-92b的靶基因结合序列

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种miR-92b的靶基因结合序列、重组载体、转化体及其用途。

背景技术

自从1993年Lee等在秀丽新小杆线虫内首次发现miRNA编码基因lin-4、2000年Reinhart等在对线虫的发育调控中发现let-7以来，人们相继在烟草、果蝇、线虫、斑马鱼、哺乳动物与人体中发现并且鉴定几百种miRNA编码基因。

miRNAs是一种广泛存在的对基因进行微调的分子，约占人类基因组的总基因数2-3％。从结构上来说，miRNAs(microRNAs)是一类长度很短的非编码调控单链小分子RNA，约18-24bp，通过与其靶mRNA分子的3端非编码区域(3’UTR)互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制，从而进一步调控多种生物学行为，如发育的进程、干细胞分化、细胞凋亡、疾病、以及肿瘤发生。

最初对mi RNA表达变化的探讨来自于对B细胞慢性淋巴性白血病(CLL)的研究，其后，众多研究小组在多种人类肿瘤中检测到miRNA的表达变化，因此被认为是发生癌变的共同特征，但是癌症的肿瘤的形成和miRNA表达变化究竟是谁因谁是果尚还没有明确的实验证据。大约50%得到注解的miRNA在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点（fragilesite），这说明miRNA在肿瘤发生过程中起至关重要的作用。另外，在采用基因芯片技术对来自多种肿瘤组织样本的miRNA表达进行检测发现，一些miRNA表达下调，而另一些miRNA表达上调，这些miRNA所起的作用类似于抑癌基因和癌基因的功能，有研究人员将miRNA命名为“oncomirs”。

miR-92b属于miR-106a-363基因簇，编码miR-106a、miR-18b、miR-20b、miR-19b-2、miR-363和miR-92b等6个miRNAs，其初级转录本位于人基因组X染色体Kis2位置[2]。在T细胞白血病中，pri-miR-106a-363过表达具有致癌潜能。此外，与miR-106a-363基因簇序列高度相似的两个旁系同源体miR-17-92基因簇和miR-106b-25基因簇，被证实能通过抑制抑癌基因和细胞周期调控基因的表达促进肿瘤进程，提示miR-106a-363基因簇可能存在相似功能。研究表明，miR-92b在原发性脑瘤中高表达（Nass D,Rosenwald S,Meiri E,et al.Brain Pathol.2009;19(3):375-83）。

因此，明确miR-92b的靶基因结合序列，对今后开发其抑制剂具有重要意义，将大大促进mi RNA在肿瘤预防、诊断和治疗中的应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供miR-92b的靶基因结合序列，为今后开发其抑制剂药物提供高效的、大通量的筛选和评价平台和手段。

为此，本发明公开了一种含有如SEQ ID NO.1所述核酸序列的miR-92b的靶基因结合序列。

在一些实施例中，所述靶基因结合序列为如SEQ ID NO.2所述核酸序列。

在一些实施例中，所述靶基因结合序列为如SEQ ID NO.3所述DKK3基因3’UTR核酸序列。

另一方面，本发明公开了一种包含本发明所述靶基因结合序列的重组载体。

在一些实施例中，所述重组载体含有萤火虫荧光素酶或海洋腔肠荧光素酶报告基因。

在一些实施例中，所述重组载体为pGL3-promoter载体。

另一方面，本发明公开了一种包含本发明所述重组载体的转化体。

在一实施方式中，所述转化体为U87胶质瘤细胞。

另一方面，本发明公开了本发明所述转化体在筛选miR-92b抑制剂中用途。

本发明公开了miR-92b的靶基因结合序列，为今后开发其抑制剂药物提供高效的、大通量的筛选和评价平台和手段，将大大促进miRNA在肿瘤预防、诊断和治疗中的应用。

附图说明

图1pGL3-promoter质粒酶切图。

图2经PCR凝胶电泳图。

图3双荧光酶活性检测。

具体实施方式

本发明还包括通过合成和重组技术生产本发明miR-92b的靶基因结合序列（多核苷酸）的方法。通过本领域已知的方法可以分离和纯化多核苷酸（DNA或RNA）、载体、转化体和生物体。