[发明专利]一种从液体样本中快速提取总RNA的试剂及方法有效
申请号: | 201210380436.9 | 申请日: | 2012-10-10 |
公开(公告)号: | CN102876663A | 公开(公告)日: | 2013-01-16 |
发明(设计)人: | 周志图 | 申请(专利权)人: | 北京百泰克生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 北京立成智业专利代理事务所(普通合伙) 11310 | 代理人: | 张江涵 |
地址: | 100086 北京市*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 液体 样本 快速 提取 rna 试剂 方法 | ||
1.一种从液体样本中快速提取总RNA的试剂,其特征在于:其组分按重量份数计包括:异硫氰酸胍10~50份,醋酸5~20份,醋酸钠10~30份,苯酚10~50份,硫氰酸铵5~20份,十二烷基肌氨酸钠0.1~10份。
2.按照权利要求1所述的一种从液体样本中快速提取总RNA的试剂,其特征在于:所述液体样本包括来源于人、动物、植物、酵母、细菌、病毒培养液的液体形式的样品。
3.一种用权利要求1所述的试剂从液体样本中快速提取总RNA的方法,其特征在于包括如下步骤:
步骤[1]按照3∶1的体积比加入所述试剂和液体样本后震荡混匀,室温下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解;
步骤[2]按照每0.75~1mL步骤[1]中加入的本发明所述试剂加入0.2mL氯仿,然后剧烈震荡并在室温下孵育5分钟帮助有机相和水相分层;
步骤[3]4℃12000rpm下离心经所述步骤[2]后所得的混合液15分钟,然后取含有RNA的上层水相;
步骤[4]在经所述步骤[3]后所得的含有RNA的水相中加入异丙醇,加入的量按照每0.75~1mL步骤[1]中加入的本发明所述试剂加入0.5mL计算,然后室温孵育10分钟使RNA沉淀;
步骤[5]4℃12000rpm下离心经所述步骤[4]后所得的混合液10分钟,然后弃上清;
步骤[6]用75%乙醇漂洗经所述步骤[5]后所得的RNA沉淀;
步骤[7]真空干燥经所述步骤[6]后得到的RNA5分钟,然后用Rnase-free H2O溶解,-80℃下保存。
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