[发明专利]一种近红外生物荧光染料在活细胞成像中的应用

权利要求书

1.一种近红外生物荧光染料在活细胞成像的应用，其特征在于，应用方法包括以下步骤：

1）细胞培养

将细胞接种于共聚焦皿中，在37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中培养12~24h；其中，细胞培养液中含相应的培养基、10%体积百分数的胎牛血清、100μg/mL青霉素和100μg/mL链霉素；

2）染料溶液的配制

将近红外生物荧光染料用二甲亚砜配成5mM~10mM的染料溶液；

3）染色

向原细胞培养液中加入步骤2）得到的染料溶液，摇匀，使近红外生物荧光染料的最终浓度为500nM~5μM，得到原细胞培养液和染料溶液的混合液，在37℃、5%CO₂、饱和湿度中孵育细胞10分钟以上，将线粒体或RNA染色；

4）成像

移去步骤3）的混合液，用磷酸盐缓冲溶液冲洗细胞，之后加入新鲜的细胞培养液，在活细胞工作站中保持37℃、5%CO₂、饱和湿度，用激光共聚焦显微镜进行拍摄成像，激发波长为640nm；

其中，所述近红外生物荧光染料具有式（I）结构：

式中，Y、Y₁分别独立的为O、S或NR₁₁；Z为NR₇R₈或OR₉；R₁、R₂、R₇、R₈、R₉、R₁₁分别独立的为氢、烃基、醚基、取代烷基、酰基或芳基；R₃、R₅、R₆、R₁₀、R₁₂、R₁₃分别独立的为氢、低级烃基、低级烷氧基、氰基或卤素；R₄为氢、低级烃基、醚基、低级烷氧基、取代烷基、酰基、氰基、芳基或卤素；为阴离子。

2.根据权利要求1所述的，近红外生物荧光染料在活细胞成像的应用，其特征在于，当R₄为氢、低级烃基、醚基、低级烷氧基、取代烷基、酰基、氰基或卤素时，所述近红外生物荧光染料对RNA染色成像。

3.根据权利要求1所述的，近红外生物荧光染料在活细胞成像的应用，其特征在于，当R4为芳基时，所述近红外生物荧光染料对线粒体染色成像。

4.根据权利要求1所述的，近红外生物荧光染料在活细胞成像的应用，其特征在于，所述近红外生物荧光染料中，R₁与R₃、R₁与R₁₃、R₂与R₃、R₂与R₁₃、R₇与R₆、R₇与R₁₀、R₈与R₆、R₈与R₁₀、R₁与R₂或R₇与R₈可形成如下Ia-In结构：

其中，R为氢或者低级烷基；Y₂为O、S或者NR₁₁。