[发明专利]一种从了哥王中制备西瑞香素的方法

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，特别是涉及一种从了哥王中制备西瑞香素的方法。

背景技术

超临界二氧化碳萃取分离原理是在超临界状态下，将超临界二氧化碳与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。由于全过程不用有机溶剂，因此萃取物绝无残留溶媒，同时也防止了提取过程对人体的毒害和对环境的污染，而且二氧化碳价格便宜，且在生产过程中循环使用。

高速逆流色谱是一种连续高效的液—液分配色谱分离技术， 它不用任何固态的支撑物或载体。 它利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，当其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。 它相对于传统的固—液柱色谱技术，具有适用范围广、操作灵活、高效、快速、制备量大、费用低等优点。

西瑞香素为香豆素类化合物，具有抗肿瘤作用，微黄色绵毛状细针晶(乙醇)，熔点250～252℃，CAS号2034-69-7，分子式C₁₉H₁₂O₇，分子量352.3，分子结构为：

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了哥王为瑞香科植物，常以根部入药，味苦、微辛，寒，有毒。具有清热解毒，化痰散结，通经利水的功效。现代研究发现了哥王的根皮中具抗癌活性的物质，其中之一为西瑞香素就是主要成分。

现有从了哥王中分离西瑞香素的方法，硅胶柱柱层析。如邵曼丽发表的论文“了哥王化学成分的提取与分离”公开的方法为乙醇提取物经过硅胶柱层析用乙酸乙酯和正丁醇萃取部分洗脱，经反复硅胶柱色谱分离得到西瑞香素。再如专利（申请号：200710071851.5）“西瑞香素的提取方法及含西瑞香素的药物”和专利（申请号：201110292410.4）“一种从了哥王中提取西瑞香素的方法”，这两种专利公开的方法也都是都是采用硅胶柱分离。这些传统方法硅胶柱分离，一般操作比较复杂，分离周期长，而且收率低、污染环境污染严重。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术的不足和缺陷，提供一种从了哥王中制备西瑞香素的高效方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种从了哥王中制备西瑞香素的方法，其特征在于以下步骤：

a．取了哥王药材粉碎，加入萃取釜，设置温度30~50℃、压力15~25MPa，先通入液态CO₂萃取杂质，再通入夹带剂进行二次萃取，在温度40~60℃、压力5~10MPa解析，得萃取物；

b．取石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水溶液，充分混合分层后，取下相注满高速逆流色谱管，开转主机，转速为700~1000rpm，同时泵入上相做流动相，建立动态平衡后，流速调节为1~4ml/min，用流动相上述溶解萃取物，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标成分，减压干燥即得。

所述的夹带剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和氯仿的一种，用量为原料量的1~3倍。

所述的石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水溶液混合比为：1~3:5~10:2~5:1~5。

本发明优势在于：

1．方法采用超临界CO₂萃取，效率高，周期短，提取产品纯度高，易于纯化，而且绿色环保；

2．方法还采用高速逆流色谱法分离，制备周期短，操作简单，制备量大，而且样品不损失，对环境友好，适合高纯度西瑞香素的制备。

具体实施方式：

实施例1：

取了哥王药材，干燥后粉碎80目，取500g投入超临界萃取釜，通入液态CO₂，流速20kg/h，在压力15MPa、温度35℃的条件下，萃取30分钟，解析，再通入80%乙醇做夹带剂，在压力20MPa、温度40℃的条件下，萃取30分钟，在温度50℃、压力6MPa状态下解析萃取物。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按1:5:2:3混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱管做固定相，开转主机，转速800rpm，同时泵入下相做流动相，建立动态平衡后，流速调节为2ml/min，用流动相溶解萃取物，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标成分，连续制备，流分回收试剂，得淡黄色粉末，经高效液相检测，含量98.3%。

实施例2：