[发明专利]羊栖菜硒多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多糖的制备方法。

背景技术

近年来，合成硒多糖的方法主要有以下几种：

（1）将SeO₃^2-取代硫酸酯多糖中的硫酸酯-SO₃^-把硒加到多糖中，以及其他如SeOCl₂ 与多糖振荡反应等，但这些方法仍存在硒结构相对单一，且硒含量不高等不足。以灵芝硒多糖为例，将吡啶30ml加入附有冷凝管和搅拌装置的100ml 三颈瓶中，边搅拌边加入三氧化硒-吡啶2.5～3.0g，在热水浴中加热至90℃，再加入多糖粉末0.5g，恒温搅拌，冷却至室温；振荡反应液用3mol/L的NaOH 溶液调至中性，加入95%乙醇，析出灵芝硒多糖。因为吡啶有强烈刺激性气味，因此此种方法要求在通风条件下进行，操作繁琐。

（2）将硼氢化钠还原硒粉得到Se^2-或-SeSe-，然后与卤代羧酸在碱性条件下振荡反应制备出相应的羧酸硒醚和二硒醚，用乙酸硒醚与邻氨基苯甲酸或水杨酸振荡反应以引入其他基团，最后与多糖中的羟基进行酰化振荡反应，合成出含硒醚、二硒醚结构新的硒多糖，此方法既可以在多糖中引入不同种类硒的结构。以麒麟菜多糖为例，首先用NaBH₄ 还原硒粉得Se^2- 或- SeSe -，然后在碱性水溶液中与氯乙酸、3-氯丙酸和对溴甲基苯甲酸在室温下振荡反应，制得相应的羧酸硒醚，收率分别为51. 9 %、62. 6 %和58. 6 %，以及丙酸和对甲基苯甲酸二硒醚，收率67. 8 %和72. 1 %。用乙酸硒醚分别与邻氨基苯甲酸和水杨酸振荡反应引入其他基团，收率73. 6 %和69. 8 %。最后这些合成的化合物通过形成酰氯与麒麟菜多糖中的羟基醚化得到含硒醚或二硒醚结构的新型硒多糖。此方法过程繁琐，多糖损失大，结构破坏严重，所用试剂为有毒试剂，在实际生产应用中价值不大。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有合成硒多糖的方法操作繁琐、有刺激性气味及所用试剂有毒的技术问题，提供了一种羊栖菜硒多糖的制备方法。

羊栖菜硒多糖的制备方法按照以下步骤进行：

一、向100ml体积分数为0.5%的HNO₃水溶液中加入1g羊栖菜多糖，得到多糖溶液； 

二、将亚硒酸钠加入到多糖溶液中，得到混合溶液，混合溶液中亚硒酸钠与羊栖菜多糖的质量比为0.4～1.2g﹕1g，然后在50℃～90℃水浴的条件下振荡反应6～10h，冷却，然后加入NaCO₃调节pH值为5～6，离心，然后透析至透析液加入抗坏血酸检测后无红色停止透析，加热浓缩，冷冻干燥，即得羊栖菜硒多糖。

本发明方法操作简单、无刺激性气味，所用试剂无毒环保，所制备的羊栖菜多糖能明显抑制S₁₈₀肉瘤在荷瘤小鼠上的生长，显著提高S₁₈₀荷瘤小鼠胸腺指数、脾指数及ConA诱导的脾淋巴细胞增殖，提高荷瘤小鼠NK细胞活性及腹腔巨噬细胞的吞噬活性。提高机体免疫功能是羊栖菜多糖抑制肿瘤生长的机制之一。

羊栖菜多糖还可调节或恢复S₁₈₀荷瘤小鼠红细胞多种生理生化功能。激光共聚焦扫描技术测定荷瘤小鼠红细胞内[Ca²⁺]_i的变化，运用相关试剂盒测定红细胞膜表面唾液酸含量和Na⁺、K⁺-ATPase及Ca²⁺、Mg²⁺-ATPase活性的变化，用流式细胞仪分析红细胞膜电位水平的变化，采用高效毛细管电泳法测定红细胞电泳合淌度的变化。结果现实羊栖菜多糖能降低荷瘤小鼠红细胞内[Ca²⁺]_i，升高膜表面唾液酸的含量，增强膜表面Na⁺、K⁺-ATPase及Ca²⁺、Mg²⁺-ATPase的活性，提高红细胞膜电位水平，提高红细胞的电泳合淌度。

羊栖菜多糖也可通过诱导肿瘤细胞凋亡起到抗肿瘤作用。羊栖菜多糖可阻滞MCF7细胞由G₀/G₁期进入S期，升高细胞凋亡指数(APO)，同时上调Fas、FasLmRNA的表达。