[发明专利]一种高效液相色谱法测定豆芽中尿素残留量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及了一种豆芽中尿素残留量的检测方法，具体涉及一种高效液相色谱法测定豆芽中尿素残留量的检测方法。

背景技术

尿素别名碳酰二胺、碳酰胺、脲，是由碳、氮、氧和氢组成的有机化合物，又称脲，其化学式为CO(NH₂)₂，白色晶体或粉末。它是动物蛋白质代谢后产物，通常用作植物的氮肥。尿素在肝合成，是哺乳类动物排出的体内含氮代谢物。尿素是第一种以人工合成无机物质而得到的有机化合物，现已广泛应用到农业生产、化妆品等领域。

近年来，不法生产经营者在豆芽生产过程中，非法添加尿素来促其快速生长。食用后，残留的尿素会被人体吸收，在体内产生亚硝酸盐，长期食用可致癌，严重危害食用者健康。各省市加大对豆芽的违法生产经营的查处力度，捣毁了一大批“问题豆芽”生产窝点，保障广大消费者的健康和利益。

目前，国内尚没有豆芽中尿素的限量要求和指标，对于尿素在食品工业生产中的使用标准也有所变化，《食品添加剂使用卫生标准》(GB 2760-2007)、《进出口食品添加剂检验规程第25部分：食品工业用加工助剂》(SN/T 2360.25-2009)均将尿素纳入允许使用的食品工业用加工助剂(食品工业用加工助剂一般应在制成最后成品之前除去，有规定食品中残留量的除外)，但《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》(GB 2760-2011)食品工业加工助剂名单中已无尿素。

《豆芽卫生标准》(GB 22556-2008)中规定，食品添加剂的品种和使用量应符合GB2760的规定；地方标准四川省《豆芽》(DB51/T1061-2010)、北京市《豆芽安全卫生要求》(DB11/377-2006)、青岛市《豆芽生产管理技术规范》(DB 3702/T090-2006)、浙江省《无公害豆芽第2部分：质量安全要求》(DB33/625.2-2007)等，主要限定铅、无机砷、总汞、镉、亚硫酸盐、亚硝酸盐、百菌清、多菌灵、2，4-D、6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素等最大残留量，并无尿素的限量要求。

目前，国内关于豆芽生产、卫生标准中尚无尿素检测方法，其他物质中尿素含量的检测标准有：《河北省地方标准：乳及乳制品中尿素氮的测定分光光度法》(DB13/T 1111-2009)、《出口蘑菇罐头中尿素残留量检验方法》(SN/T 1004-2001)、《游泳水中尿素测定方法》(GB/T 18204.29-2000)，主要包括二乙酰一肟比色、对二甲氨基苯甲醛比色法，利用这些物质与尿素产生颜色反应，在一定波长条件下测定吸光度，从而定量检测尿素含量。安徽省地方标准《化妆品中尿素的测定高效液相色谱法》(DB34/T1330-2011)，用乙腈+水溶解化妆品中的尿素，以乙腈+水为流动相，使用C18色谱柱分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。

国内外文献中尿素检测方法有两类：

第一类是化学分析法，主要包括二乙酰一肟比色法、对二甲氨基苯甲醛比色法、邻苯二甲醛比色法、丁二酮肟比色法、苯酚次氯酸盐比色法、酶解纳氏比色法等，此类文献原理基本类似：尿素与某些物质发生颜色反应，在一定波长条件下检测含量。此法应用于豆芽中尿素的测定，由于豆芽基质有浅黄色，对比色结果干扰较大，容易造成假阳性。

第二类是液相色谱法，此类方法又分为两种，一种是用某些溶剂直接提取样品(黄酒、土壤等)中的尿素，采用C18柱分离，二极管阵列检测器在190-205nm紫外光区域检测尿素含量，此种方法在测定豆芽中尿素时，豆芽基质也容易造成影响，杂质峰对目标峰有干扰；另一种是利用某些特定物质(主要是9-羟基呫吨)对尿素进行衍生，产生具有荧光的物质，从而利用液相色谱-荧光检测器检测样品(红酒、人体尿液、黄酒等)中尿素的含量。(Shona Clark，et al.Determination of urea using high-performance liquid chromatography with fluorescence detection after automated derivatisation with xanthydrol.Journal of Chromatography A，2007(1161)：207213；刑江涛等.高效液相色谱-荧光检测器法测定黄酒中尿素含量.酿酒科技，2011，3(201)：104-106.