[发明专利]广东凉茶颗粒电喷雾质谱指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及一种广东凉茶颗粒的质量评价和来源区分方法，具体涉及广东凉茶颗粒的直接电喷雾质谱指纹图谱的构建方法和标准指纹图谱。 

背景技术

广东凉茶是岭南人民根据本地的气候和水土特性，在长期预防疾病与保健过程中以中医养生理论为指导，以中草药为基础，研制总结出来的具有清热解毒、生津止渴等功效的一类植物饮料。广东凉茶颗粒是著名的广东凉茶之一，由岗梅、山芝麻、五指柑、淡竹叶、木蝴蝶、布渣叶、火炭母、金沙藤、广金钱草和金樱根10味药材组成，具有清热解毒、祛湿生津、凉血排毒等功效，用于四时感冒、发热喉痛、湿热积滞、口干尿黄等症。现已有王老吉广东凉茶无糖颗粒、王老吉广东凉茶含糖颗粒、香雪广东凉茶含糖颗粒、观鹤广东凉茶含糖颗粒、龙马广东凉茶含糖颗粒和速永康广东凉茶含糖颗粒等剂型在市场上销售。 

目前国内还没有文献报道对广东凉茶颗粒的质量评价和来源区分的研究。中药指纹图谱技术是一种表征中药所含成分与其质量关系的有效手段，已成为国内外广泛认可的重要质量评价模式。常规的指纹图谱方法为色谱法，由于需要很长的色谱分离时间，无法满足快速和高通量的要求。直接电喷雾质谱指纹图谱可在常压条件下直接进行指纹图谱分析，不需要色谱分离，因此，分析时间大大缩短，一个完整的指纹谱图分析仅仅需要不到30秒的时间，满足了快速分析和高通量的要求。因此，建立广东凉茶颗粒的快速、高效、高通量直接电喷雾质谱指纹图谱方法，从整体上全面反映制剂的内在质量，为其质量控制提供一种提供直观、简便、有效的手段。 

发明内容

本发明的目的在于为广东凉茶颗粒的质量评价、来源区分和真伪鉴别提供一种新的快速、可靠、高通量指纹图谱方法，通过建立广东凉茶颗粒电喷雾质谱指纹图谱的方法，并由此方法得到广东凉茶颗粒的标准指纹图谱。 

为达到本发明的目的所采用的技术方案：用直接电喷雾质谱法建立广东凉茶颗粒电喷雾质谱指纹图谱的方法，具体包括如下步骤： 

(1)供试品溶液的制备：精密称取广东凉茶颗粒1～20g，50％～100％甲醇萃取，采用索氏萃取或超声萃取或微波辅助萃取或加速溶剂萃取方法进行萃取，萃取时间为10～120min，萃取液浓缩定容至5～50mL，针孔式微孔滤膜过滤，即得供试品溶液； 

(2)质谱条件：采用电喷雾质谱直接检测，便携式蠕动泵直接进样，流速10～100μL/min，或高效液相色谱不经过色谱柱分离进样，流速100～500μL/min；离子源采用电喷雾离子源；质谱质量分析器采用飞行时间或四级杆或离子阱或静电场轨道阱或傅立叶变换离子回旋共振质量分析器；谱图采用全扫描模式记录质谱的轮廓图，扫描质量范围m/z 100～1000； 

(3)测定：取供试品溶液注入质谱仪，进样量1～100μL，按照直接电喷雾质谱法测定，记录质谱图，得到指纹图谱； 

(4)标准指纹图谱：供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》，均值法计算生成标准指纹图谱。 

(5)主成分分析：供试品指纹图谱采用统计学软件进行主成分分析，进行质量评价和来源区分。 

本发明最佳的检测方法可以通过下述步骤实施：(1)供试品溶液的制备：称取广东凉茶颗粒5.0g，加入甲醇50mL，超声萃取30min，萃取液旋转蒸馏浓缩至近干，加入5mL甲醇溶解，摇匀，针孔式微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；(2)质谱条件：50μL/min流速便携式蠕动泵直接进样，或流速200μL/min高效液相色谱不经过色谱柱分离进样，电喷雾离子源，飞行时间质量分析器，全扫描模式记录质谱的轮廓图，扫描质量范围m/z 100～1000；(3)测定：取供试品溶液注入质谱仪，进样量5μL，按照直接电喷雾质谱法测定，记录质谱图，得到指纹图谱；(4)标准指纹图谱：供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》，均值法计算生成标准指纹图谱；(5)主成分分析：供试品指纹图谱采用统计学软件进行主成分分析，进行质量评价和来源区分。 

按照本发明所提供指纹图谱的建立方法所得广东凉茶颗粒的指纹图谱中有61个特征离子共有峰，其中特征离子m/z 133为苹果酸、m/z 191为奎尼酸、m/z 191为葡萄糖酸、m/z 353为绿原酸、m/z 515为异绿原酸。 

本发明的原理是根据广东凉茶颗粒中主要的活性成分是药材岗梅、山芝麻、五指柑、淡竹叶、木蝴蝶、布渣叶、火炭母、金沙藤、广金钱草和金樱根的提取物，其电喷雾质谱指纹图谱能从整体面貌上把握广东凉茶颗粒的质量。 

本发明的有益效果如下：