[发明专利]从生物样本提取核酸的方法

权利要求书

1.一种从生物样本提取核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

裂解所述生物样本，以便得到含有核酸的裂解产物；以及

从所述裂解产物中分离所述核酸，

其中，裂解所述生物样本进一步包括：

利用含有溶菌酶、蜗牛酶和溶壁酶的混合物，对所述生物样本进行消化；

将消化产物离心，收集沉淀；以及

利用裂解液，对所述沉淀进行裂解，以便得到所述含有核酸的裂解产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶菌酶、蜗牛酶和溶壁酶的质量比为1：1：1。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解液含有200mmol/L NaCl，100mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，2.0%SDS，50mmol/L EDTA，0.5%Triton X-100，

任选地，所述裂解液中进一步含有蛋白酶K，

任选地，所述裂解是在50～55摄氏度下进行的。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，从所述裂解产物中分离核酸进一步包括：

对所述裂解产物进行离心，收集第一上清液；

将含有酚、氯仿和异戊醇的混合物与所述第一上清液按照等体积混合，进行离心后，收集第二上清液，其中，所述含有酚、氯仿和异戊醇的混合物中酚、氯仿和异戊醇的体积比为25：24：1；

将含有氯仿和异戊醇的混合物与所述第二上清液按照等体积混合，进行离心后，收集第三上清液；以及

将含有异丙醇和醋酸钠的混合物与所述第三上清液按照0.7：1的体积比混合，进行离心后，收集核酸沉淀。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样本是通过下列步骤从流体中收集的微生物样本：

在压力差的作用下，使含有微生物的流体通过滤膜，

其中，

所述滤膜进样侧的压力高于所述滤膜出样侧的压力，

所述滤膜的孔径使得所述微生物被截留在所述滤膜上，

任选地，所述流体为气体，

任选地，所述气体为空气，

任选地，所述压力差是通过所述出样侧空气的定向流动形成的，优选，所述压力差为1000Pa<H≤3000Pa，

任选地，所述微生物为选自细菌、真菌、病毒和放线菌的至少之一。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述滤膜的孔径为0.1～10微米。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述滤膜为选自尼龙膜滤膜、聚脂核孔膜、聚丙烯膜、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜和醋酸纤维膜的至少之一。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述滤膜为醋酸纤维膜。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述醋酸纤维膜的孔径为0.22微米。