[发明专利]一种具有广泛宿主的穿梭表达载体

权利要求书

1.一种质粒，包括如下元件：复制原点oriV、复制蛋白Rep的编码基因、接合起点oriT、接合蛋白Mob的编码基因和外源基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次为启动子、供外源基因插入的多酶切克隆位点以及转录终止序列。

2.如权利要求1所述的质粒，其特征在于：

所述复制原点oriV如序列表的序列1自5’末端第2041至2530位核苷酸所示；所述接合起点oriT如序列表的序列1自5’末端第4234至4235位核苷酸所示。

3.如权利要求1或2所述的质粒，其特征在于：所述复制蛋白Rep由复制蛋白RepA、复制蛋白RepB和复制蛋白RepC组成；所述接合蛋白Mob由接合蛋白MobE、接合蛋白MobD、结合蛋白MobC、结合蛋白MobB和结合蛋白MobA组成。

4.如权利要求3所述的质粒，其特征在于：

所述复制蛋白RepC的编码基因的反向互补序列如序列表的序列1自5’末端第81至755位核苷酸所示；所述复制蛋白RepB的编码基因如序列表的序列1自5’末端第6337至7425位核苷酸所示；所述复制蛋白RepA的编码基因的反向互补序列如序列表的序列1自5’末端第946至1803位核苷酸所示；

所述接合蛋白MobE的编码基因的反向互补序列如序列表的序列1自5’末端第2461至3105位核苷酸所示；所述接合蛋白MobD的编码基因的反向互补序列如序列表的序列1自5’末端第3065至3748位核苷酸所示；所述结合蛋白MobC的编码基因的反向互补序列如序列表的序列1自5’末端第3761至4159位核苷酸所示；所述结合蛋白MobB的编码基因如序列表的序列1自5’末端第4227至4739位核苷酸所示；所述结合蛋白MobA的编码基因如序列表的序列1自5’末端第4897至7425位核苷酸所示。

5.如权利要求1至4中任一所述的质粒，其特征在于：所述启动子为连四硫酸盐水解酶基因tetH的启动子，所述连四硫酸盐水解酶基因tetH的启动子优选为序列表的序列3自5’末端第76至156位核苷酸所示的DNA分子。

6.如权利要求1至5中任一所述的质粒，其特征在于：所述转录终止序列如序列表的序列5自5’末端第51至100位核苷酸所示。

7.如权利要求6所述的质粒，其特征在于：所述质粒如序列表的序列7所示。

8.一种表达外源基因的方法，包括如下步骤：

（1）将外源基因插入权利要求1至7中任一所述质粒的多克隆位点，得到重组质粒；

（2）将所述重组质粒转化宿主菌并在宿主菌中表达所述外源基因。

9.一种表达外源基因的方法，包括如下步骤： 

（1）将外源基因插入权利要求1至7中任一所述质粒的多克隆位点，得到重组质粒；

（2）将所述重组质粒转化宿主菌，得到供体菌；

（3）通过共培养，将所述供体菌中的所述重组质粒导入所述受体菌，得到重组菌；

（4）培养所述重组菌，表达所述外源蛋白。

10.权利要求1至7中任一所述的质粒在喜温嗜酸硫杆菌的遗传转化中的应用。