[发明专利]一种含有生物蛋白的外用溶液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种含有生物蛋白活性成分的外用溶液及其制备方法。

背景技术

由于基因重组技术的发展，药用蛋白质制剂的商品化生产已成为现实。近来已有140多种重组蛋白质制剂在进行I期或I期以上的临床试验,有12种已获美国FDA的批准。然而,由于蛋白质的理化性质，使其在纯化、分离、贮存和销售时存在独有的因难。蛋白质的降解途径可分为二种类型，即化学不稳定性和物理不稳定性。前者系指蛋白质通过成键或断键生成新的化合物；而物理稳定性则不涉及蛋白质的共价键变异,而是指蛋白质变成更高级的结构(二级或更高)，包括变性、表面吸附、凝聚和沉淀。蛋白质药物的这些理化缺陷，限制了其制剂的应用与发展。目前，为了克服蛋白质药物的不稳定性，一般采用冷冻干燥技术制得冻干粉末后保存，使用时再复溶。尽管与液体制剂相比冻干制剂稳定，但是冷冻干燥是一个非常复杂的过程，在预冷第一、第二干燥阶段和储存过程中，药物的结构可能受器重的物理化学变化影响而发生变化，特别是蛋白质多肽类药物的二、三级结构易受破坏，失去活性而影响药效。使用时复溶也存在诸多风险，如含量不均一、析出杂质、有异物、成本高、使用不方便等。

 皮肤伤口愈合是复杂的生物学过程，在这一过程中，有许多细胞参与，成纤维细胞被认为是创伤修复的主要细胞之一。近年来研究发现，多种细胞生长因子，如b-FGF、aFGF、PDGF、TGF、IGF，表皮生长因子等在创面愈合中有着巨大的作用，它们对皮肤伤口的纤维化、血管化和再上皮化有介导和调控的作用，促进创面愈合。其中，bFGF对来源于中胚层和神经外胚层的细胞（如上皮细胞、真皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等）具有促进修复和再生的作用，在组织分化、正常组织结构和生理功能维持及损伤损伤修复等方面具有显著的疗效。研究表明：它一方面直接刺激成纤维细胞和细胞外基质的蛋白合成，形成胶原，另一方面，可以改善局部微循环和组织营养状况，促进成欣慰细胞、成肌细胞增殖，使肉芽组织迅速生长，创缘上皮迅速向中心爬行使创面缩小而愈合。但是由于成纤维生长因子、表皮生长因子等为融合蛋白，容易受到各种外界因素的影响而降低活性，制剂中的稳定性很差，影响治疗效果，高温或过冷环境也影响其生物活性，容易发生蛋白变性。

 在目前的现有技术中，为了解决蛋白制剂的稳定性和冻干制剂的缺点，中国专利申请200510036641.3公开了一种重组人碱性成纤维细胞生长因子的外用溶液，其中采用肝素钠为保护剂，实现活性多肽溶液状态的低温保存。但是，在该方案中并没有公开外用溶液中的主要有效成分rb-bFGF的活性指标，同时，有文献报道，肝素钠可产生罕见皮肤刺激如烧灼感，或过敏反应如皮疹、瘙痒等副作用，在肝素钠软膏的说明书的注意事项中已明确写明了肝素钠勿直接涂于溃烂伤口和粘膜组织上，不适用与严重创伤、烧烫伤、以及某些疾病例如糖尿病引起的皮肤溃疡的创面的治愈。从2007年12月中旬至2008年1月，美国制造公司百特公司(Baxter International Inc.)连续接到报告称，大约有350人在使用了该公司生产的肝素钠(heparin)后，产生严重的过敏反应，其中四人已经死亡。这是近年比较大的一个肝素钠不良反应事件。

 此外，中国专利申请201110342458.1公开了重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用溶液，其中采用人血白蛋白为蛋白保护剂，为了保持溶液的稳定性，还加入了溶液保护剂甘露醇和聚乙二醇中的一种或者二者的组合。该发明案虽然避免了采用肝素类物质如肝素钠作为保护剂，但是采用的保护剂人血白蛋白是血液制品，虽然经过处理，但是其中的一些物质可能会使接受者产生过敏反应，甚至是感染病毒，例如艾滋病毒。对于烧伤创面特别是含有溃烂的创面容易产生感染，也有人血白蛋白会产生寒颤、发热、颜面潮红、皮疹、恶心呕吐等症状副作用的报道。而甘露醇对蛋白质的保护作用与其浓度、形态结构有关，而结晶态的甘露醇则失去保护功能；1％或更低浓度的甘露醇通过无定型结构的形成而阻止蛋白质分子的聚集，但是高浓度的甘露醇则易于形成结晶，会促进蛋白质的聚集，因此，其加入对蛋白质变性会产生很大的风险。研究显示，人血白蛋白和甘露醇或聚乙二醇的加入，放置后会降低活性蛋白的活性和纯度。