[发明专利]一种牛蒡子苷粗品的纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于中药制备技术领域，涉及一种药物提取物的纯化方法，具体涉及一种牛蒡子苷粗品的纯化方法。

背景技术

牛蒡子为菊科植物牛蒡（Arctium lappa L.）的干燥成熟的果实，原名恶实，始载于《名医别录》，列为中品。牛蒡子在我国各地均有分布，收载于历版《中国药典》，具有疏散风热，宣肺透疹，解毒利咽的功效。临床上用于治疗风热感冒，咳嗽痰多，麻疹，风疹，咽喉肿痛，痄腮丹毒，痈肿疮毒。

牛蒡子苷（Arctiin）在牛蒡子中含量在5%以上（中国药典，2005版），是其发挥药理作用的主要生物活性前体物质。牛蒡子苷不直接参与调控机体生理功能，而是在人或动物的肠道菌群的作用下代谢成牛蒡子苷元（Arctigenin）后，对机体发挥清热解毒、抗病毒与抗肿瘤等作用（Nose M,et al.Planta Medica 1992,58(6):520-523;Kato T,et al.Anticancer Research 1998,18(2A):1053-1057）。在化学结构上，牛蒡子苷比牛蒡子苷元少一分子葡萄糖基。

目前，制备牛蒡子苷的方法主要有醇提法、超声辅助醇提法、微波辅助醇提法和超临界提取法，后三种方法提取的牛蒡子苷的纯度高（约40%-60%），但所需要的仪器设备价格昂贵，因此较难实现企业化规模生产；而醇提法则主要用乙醇提取，试剂廉价，方法简便，但提取的牛蒡子苷产品的纯度低（约5%），往往含有较多的多糖、蛋白质等化合物均需要进一步纯化后才能使用。目前，涉及纯化牛蒡子苷乙醇提取物粗品纯化研究的较少，王卫东等（《食品科学》，2009,20(18):187-191）采用比吸附量大（50.38mg/kg）、解吸率较高（88.50%）的HPD-700型大孔吸附树脂对微波辅助醇提法提取的纯度为39.2%的牛蒡子苷粗品进行纯化，使最终纯品的浓度达到63.8%，为粗品的1.6倍，纯化效果较好。而孙瑜等（《中国实验方剂学杂志》，2011,17(7):13-15）筛选出的解吸率为33.78%的D101大孔吸附树脂对纯度为5.7%的牛蒡子苷乙醇提取粗品进行纯化，所得牛蒡子苷纯品的浓度仅为46.95%-60.53%，相对较低。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种牛蒡子苷粗品的纯化方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种牛蒡子苷粗品的纯化方法，应用D4006型大孔吸附树脂和硅胶柱层析相结合的方法对牛蒡子醇提物粗品进行纯化而得高纯度的牛蒡子苷，所述的牛蒡子醇提物粗品中牛蒡子苷的含量为4.5~6.0%。即牛蒡子醇提物粗品经D4006型大孔吸附树脂动态吸附-洗脱得到初级纯化产物，再经硅胶柱层析纯化得到高纯度的牛蒡子苷。

其中，所述的牛蒡子醇提物粗品通过如下方法制备：取牛蒡子药材粉末，用8~12倍量石油醚脱脂后，加入7~9倍量的70％乙醇，回流提取2~3次，每次1~1.5h，合并提取液。

所述的牛蒡子醇提物粗品优选通过如下方法制备：取牛蒡子药材粉末，用10倍量石油醚脱脂后，加入8倍量的70％乙醇，回流提取3次，每次1h，合并提取液，经高效液相色谱法（HPLC）测定牛蒡子苷的含量为5.4%（色谱条件为：Agilent ZorbaXSB-C18（5μm，4.6mm×250mm）色谱柱；流动相为甲醇：水（1：1.1）；测定波长280nm；流速0.5mL/min；进样量10μL；柱温为室温）。

所述的提取液经减压浓缩液，加20％乙醇，充分搅拌，超声处理20min，使其充分溶解，0.45μm滤膜过滤后用流动相（甲醇：水=1：1）定容至1000mL，经HPLC测定样品溶液中牛蒡子苷的质量浓度为4.90mg/mL，备用。

所述的D4006型大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂，外观为乳白色不透明颗粒，粒径范围为0.3～1.0mm，比表面积为400～440m²/g，孔径为6.5～7.5nm，孔容为0.73～0.77mL/g，优选南开大学化工厂生产的D4006型大孔吸附树脂。

D4006型新树脂预处理方法为：95%乙醇浸泡24h，装柱后用95%乙醇洗至流出液与水混合不产生白色混浊为止，然后用去离子水洗尽乙醇，再用5%（V/V）HCl溶液浸泡3h，水洗，再用5%（V/V）的NaOH浸泡3h，去离子水洗至中性，备用。