[发明专利]氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR反应液、阴性质控品和阳性质控品；所述PCR反应液包括引物、PCR Buffer、dNTP混合液、饱和荧光染料、Taq酶、UNG酶；所述dNTP混合液为dATP、dCTP、dGTP和dUTP的混合液；

所述引物包括：

1494位点特异性引物T，所述引物T的序列为：SEQ ID NO:1；

1555位点特异性引物G，所述引物G的序列为：SEQ ID NO:2；

两位点公用的下游引物R，所述引物R的序列为：SEQ ID NO:3；

一对内参beta-actin引物A1和引物A2，所述引物A1的序列为SEQ ID NO:4，所述引物A2的序列为SEQ ID NO:5。

2.根据权利要求1所述的氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液中引物终浓度为50-500nM，PCR Buffer中的MgCl2终浓度为1.5-9mM，所述dNTP混合液的各组分终浓度为100-300nM，Taq酶终浓度为1-7.5IU/反应，UNG酶终浓度为0.05-0.3IU/反应。

3.根据权利要求1所述的氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测试剂盒，其特征在于，所述饱和荧光染料为EvaGreen染料、LC Green PLUS染料、ResoLight染料或SYTO 9染料。

4.根据权利要求1所述的氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测试剂盒，其特征在于，所述的PCR反应液各组分含量为：

去离子水：16.14μL；

10×PCR buffer：2.5μL；

10mM dATP、dCTP、dGTP、dUTP的等体积混合液：2μL；

10mM dUTP：0.5μL；

100μM引物A1：0.01μL；

100μM引物A2：0.01μL；

100μM引物G：0.04μL；

100μM引物T：0.03μL；

100μM引物R：0.02μL；

20×Evagreen：1.25μL；

5U/μL超纯Taq酶：0.2μL；

1U/μL UNG：0.3μL。

5.一种氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测方法，其特征在于，包括如下步骤:

（1）采用权利要求1至4任一项所述的氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测试剂盒对样品的模板DNA的目的基因进行PCR扩增；

（2）对PCR产物的目的基因的突变位点进行熔解曲线分析。

6.根据权利要求书5所述的氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测方法，其特征在于，所述步骤（1）进行PCR扩增反应的条件为：

50℃、1-10min；

90-95℃、10min；

95℃、5-30s，50-65℃、30-90s，30-45个循环。

7.根据权利要求书6所述的氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测方法，其特征在于，所述步骤（1）进行PCR扩增反应的条件具体为：

50℃、5min；

90-95℃、10min；

95℃、15s，60℃、30s，72℃、30s，35个循环。

8.根据权利要求书5所述的氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测方法，其特征在于，所述步骤（2）PCR产物进行熔解曲线分析的程序为：70℃-90℃连续检测，15次/s。