[发明专利]一种核桃青皮的提取物及其抑菌用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物植物的提取物，尤其是一种核桃青皮的提取物及其抑菌用途，属于中药或药物用植物领域。

背景技术

核桃青皮又名青龙衣，是核桃未成熟时外部的一层厚厚的绿色果皮，随着核桃逐渐成熟青果皮会渐渐变黑，最后自然脱落。它是一种有毒物质，正常人服用过量会导致死亡。据相关资料记载，核桃叶、枝、青皮、树皮都有药用价值，具有杀菌、消毒、利尿、滋补、解毒等功效。但关于核桃青皮在农业病虫害防治方面却报道得较少。

根腐菌是一个广泛分布的土壤病真菌，会传染木本植物引起根部腐烂与溃疡。它需要潮湿的土壤与温暖的温度，特别容易侵害敏感植物(例如夏季干旱受损的植物)。根腐菌威胁林业、园艺业与水果业，超过900个木本多年生的树种会被传染，进而造成族群消减。目前防治根腐菌主要依靠农药，但使用农药不可避免地会有毒性残留，并且施药过程也会对土壤、人员造成一定的伤害。因而，研发一种安全无残留的根腐菌防治药物具有极高的农业应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药用植物提取物，特别是一种核桃青皮提取，用于防治根腐菌等菌类。本发明目的是通过以下技术方案实现的。

一种核桃青皮提取物，其特征在于该提取物是按如下方法制得的：称取核桃青皮，磨碎成浆状，按1g∶2-5ml的比例加甲醇，超声提取20-40min，过滤，残渣用同法再提取2次，合并3次滤液，浓缩、干燥，即得。

优选的，上述提取物是按如下方法制得的：称取核桃青皮100g，磨碎成浆状，加入甲醇250ml，超声提取30min，减压抽滤，残渣用同法再提取2次，合并3次抽滤液，浓缩、干燥，即得。

进一步地，上述方法所得的甲醇提取物还可以用石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇进一步萃取纯化，得到相应的提取物。比如，称取核桃青皮甲醇提取物浸膏10ml，加入100ml蒸馏水，装入分液漏斗中，混合均匀；采用液-液分配萃取法依次用石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次(100ml/次)；分别合并各极性萃取液，旋转蒸发仪浓缩得浓缩液，适量无菌水溶解得提取物。

以上述方法获得的各提取物，对菌类，尤其是真菌具有明显的抑制作用，以下实验例用于说明其效果。

有益效果

1材料与方法

1.1试验仪器、材料及试剂

九阳粉碎机、布式漏斗、RE-6000多功能旋转蒸发器；ZHJH-C型智能型垂直流超净工作台(上海智城分析仪器制造有限公司)；LS系列立式压力蒸汽灭菌器(江阴滨江医疗设备有限公司)；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

核桃青皮采自北京市密云县。选取外表新鲜干净的青皮核桃，剥下核桃果实的外青皮，用于后续不同极性提取物的制备。

人参根腐病菌C.destructans由中国医学科学院药用植物研究所提供。

其余试剂为分析纯。

1.2试验方法

1.2.1提取物制备

准确称取核桃青皮100g，用植物粉碎机磨碎成浆状。放入1000ml锥形瓶，用250ml甲醇浸泡，超声提取30min。提取物经抽滤，残渣再用250ml甲醇提取，重复2次。合并3次抽滤液，用旋转蒸发器浓缩得浓缩液。

称取核桃青皮甲醇提取物浸膏10ml，加入100ml蒸馏水，装入分液漏斗中，混合均匀。采用液-液分配萃取法依次用石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次(100ml/次)。分别合并各极性萃取液，旋转蒸发仪浓缩得浓缩液，适量无菌水溶解得提取物水溶液(表1)。

表1供试提取物样品

1.2.2 PDA培养基制备：取200g去皮马铃薯，切成小块后加l L水，沸水煮30min，双层纱布过滤，滤液加20g葡萄糖、20g琼脂粉，用蒸馏水定容至1L。取锥形瓶以100mL分装，于121℃高温湿热灭菌20min，作为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。

1.2.3抑菌试验

分别向15ml事先灭菌的PDA培养基中加入7.5ml、0.25ml、25μl和2.5μl不同极性的核桃青皮提取物水溶液，充分混匀后倒平板。然后在垂直流超净工作台的无菌环境下接种人参根腐病菌，培养10天后，用十字交叉法统计人参致病菌的菌落直径。每种处理设置3次重复。

1.2.4统计分析