[发明专利]一种山绿茶中所含总三萜及冬青素A的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药有效部位及单体的提取富集工艺及其应用，特别是涉及山绿茶总三萜和冬青素A单体提取富集方法及其心血管活性，属于中药技术领域。

背景技术

心血管疾病是临床常见病症，今年来随着经济的快速发展、生活水平的不断提高，特别是饮食结构和生活习性的改变，使得心血管疾病在全世界的发生率和死亡率不断提高。动脉粥样硬化是动脉硬化的一种，表现为大、中动脉内膜出现含胆固醇、类脂肪等的黄色物质，多由脂肪代谢紊乱、神经血管功能失调引起。由动脉粥样硬化导致的心脑血管疾病已经成为现代社会中最重要的致死和致残的原因。目前，他汀类是临床上降脂治疗的首选药物，关于中药用于抗动脉粥样硬化药效评价的报道较少，也尚无单体成分开发的这类药物上市。

山绿茶为冬青科冬青属植物海南冬青Ilex hainanensis Merr.的干燥叶。具有清热解毒，消肿止痛，活血通脉的功效。用于降血压，降血脂，降胆固醇，冠心病，脑血管意外所致的偏瘫，风热感冒，肺热咳嗽，喉头水肿，扁桃体炎，痢疾等症，为广西少数民族民间草药，使用历史悠久，已收载于《广西中药材标准》(1990年版)。

植物化学研究表明，山绿茶的主要化学成分为三萜类、黄酮类等成分。现已分离得到的单体化合物主要有冬青素A、熊果酸、齐墩果酸、α-香树脂素、β-香树脂素、冬青皂苷A1等。同时，三萜和冬青素A也是山绿茶主要的生物活性成分，冬青素A的结构式如图1所示。

药理研究表明，山绿茶具有显著的降血压和降血脂的作用，且未见明显毒副反应。三萜类是山绿茶的主要活性部位，具有显著的抗菌、抗炎以及肝脏保护作用。而冬青素A是山绿茶中主要的三萜类化合物，在山绿茶中的含量可以达到5％以上，也具有明显的抗菌作用，且对肝癌诱导的肝功能损伤具有明显的保护作用。目前尚无山绿茶总三萜和冬青素A用于治疗动脉粥样硬化的研究报道。

本发明提供了山绿茶总三萜和冬青素A的提取富集方法，并经过药理实验验证了山绿茶总三萜和冬青素A的抗动脉粥样硬化作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从山绿茶中得到有效成分提取物，即山绿茶总三萜和有效成分单体，即冬青素A的方法以及山绿茶有效成分提取物和单体在治疗心血管疾病方面的应用，具体是在治疗动脉粥样硬化方面的应用。

本发明以如下技术方案解决上述技术问题：

1、提取富集有效成分提取物，即山绿茶总三萜的方法有以下步骤：

原料山绿茶用70％-95％乙醇回流提取，提取液浓缩离心后得上清液和沉淀部分；沉淀部分以30％-40％乙醇混悬，再以石油醚萃取，下层溶液减压浓缩干燥后得总三萜。

提取富集总三萜的最优化技术方案为：

a.取原料山绿茶，加山绿茶12倍量(v/w)、浓度为90％的乙醇溶液浸泡过夜，加热回流提取2次，每次2h；

b.合并提取液，浓缩得稠浸膏，以4000r/min离心10min，分离得到上清液和沉淀部分；

c.将沉淀部分以30％-40％乙醇混悬，再以石油醚(3：1，v/v)萃取2次脱色，下层溶液减压浓缩后得浸膏，自然晾干，粉碎，过60目筛，得山绿茶总三萜。

2、提取富集山绿茶有效成分单体，即冬青素A的方法有以下步骤：

原料山绿茶用70％-95％乙醇回流提取，提取液减压回收蒸干，以水溶解；加入5％的氢氧化钾水解，有机溶剂萃取，有机溶剂层回收至干，上硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮和氯仿-甲醇等梯度洗脱，收集洗脱液，减压回收洗脱溶剂，得到冬青素A单体。

提取富集山绿茶冬青素A单体的最优化技术方案为：

a.取原料山绿茶，加山绿茶12倍量(v/w)、浓度为90％的乙醇溶液浸泡过夜，加热回流提取2次，每次2h，合并提取液，减压回收蒸干，以水溶解；

b.加入10％盐酸，加热回流3h，加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层回收至干；

c.取浸膏上硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，收集洗脱液，减压回收洗脱溶剂，得到冬青素A单体。

周园等报道了毛冬青中冬青素A的制备方法，本方法与之相比，其优势在于：

由于山绿茶中除了含有冬青素A外，还含有大量的皂苷类化合物，如冬青皂苷A1，6‘-O-乙酰冬青皂苷A1等，其中冬青皂苷A1在药材中的含量达到3-4％，而这些皂苷类化合物都是以冬青素A为苷元的。本方法通过加入酸或碱，进行水解，使这些皂苷类化合物都水解转化为冬青素A，进而极大地提高了冬青素A单体的得率(见具体实施例11)，并且该步骤的增加并不增加本方法的成本。