[发明专利]一种人生长素融合蛋白TAT-hGH及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因生物工程技术领域，具体涉及一种人生长素TAT-hGH重组融合蛋白，更具体涉及含有人生长素基因的基因工程菌株E.coli Origami B(DE3)pLysS(pET-TAT-hGH)，本发明还涉及所述TAT-hGH重组融合蛋白的制备方法以及该融合蛋白TAT-hGH在促细胞增殖、促动物生长和穿肠中的应用。 

背景技术

人生长素(human growth hormone，hGH)是一种由人的脑垂体前叶合成并分泌的蛋白类激素。生长激素先翻译成激素原，即生长激素前提蛋白，生长激素前体蛋白含有217个氨基酸，氨基端1~26个氨基酸为信号肽，若信号肽的不能特异性切除，则该激素无法产生活性。成熟的人生长激素是单一无糖基化多肽链，由191个氨基酸组成，N端和C端均为苯丙氨酸，分子量在22kDa左右（ChohHaoLi(1982)Human Growth Hormone：1979—1981．Molecular and CellularBiochemistry，46：31-41）。含两个二硫键，由这些半胱氨酸残基形成的二硫键对生长激素生物活性的稳定维持着极其重要的作用。 

生长素通过介质，间接促进生长期的骨骺软骨形成，促进骨及软骨的生长，从而使躯体增高。生长激素对中间代谢及能量代谢也有影响，可促进蛋白质合成，增强对钠、钾、钙、磷、硫等重要元素的摄取与利用，同时通过抑制糖的消耗，加速脂肪分解，使能量来源由糖代谢转向脂肪代谢。目前在临床上，已被广泛地用于儿童生长激素缺乏症、成人生长激素缺乏症、大面积烧伤、短肠综合症、肠外瘘、急性坏死性胰腺炎、重症感染、扩张性心肌病、呼吸功能衰竭、重症乙肝(肝硬化)、肾衰等治疗领域，在减肥、美容等领域也在迅速增长。 

值得一提的是现在科学发现hGH减少才会出现人体的衰老。在人的青春期，hGH的分泌量逐步上升，直到青春期后期，达到高峰，之后逐渐下降，60岁以上的老年人，他的hGH的分泌量不到青春期最高峰值的1/6，分泌水平已经不到青春期的一半，从此以后人体开始显露衰老迹象。1996年，美国FDA批准HGH 为唯一的抗衰老激素治疗药物。 

hGH能起作用，绝大部分情况下都是通过胰岛素样生长因子(Insμlin GrowthFactor，IGF)介导。人体有很多组织都能合成并分泌IGF，IGF是一种受hGH调节的单链多肽，包括IGF I、IGF Ⅱ等，hGH的大多数效应都是由IGF I介导，而血液中的IGF I主要来源于肝（DauhGHaday W．H．，Rotwein P．(1989)Insulin-like growth factors I and II：Peptide,messenger ribonucleic acid and genestructures，serum，and tissue concentrations.Endocrine Review，10:68—91）。 

在1920年，科学家就发现了hGH的存在，最初的来源是提取于动物的垂体，但是临床试验发现，在人体中，这种GH是没有活性的。1956年，科学家李和Papkoff首次从人的垂体中提取出hGH,1958年，美国内分泌学家M．Rabem首次将hGH注射到一个缺乏hGH的小孩体内，治愈了第一例侏儒症，使hGH真正开始了在临床上的应用。但是从人体中提取的hGH，不仅受到资源限制，同时成本过高，还存在的病毒污染，美国食品和药物管理局下令停止生产和销售这种从人脑中提取的天然的hGH。而如今hGH大多采用基因工程的方法生产。基因工程方法的生产也可分成两类：一类是在原核生物中生产，另一类是在真核细胞中生产。