[发明专利]一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺

说明书

（一）        技术领域

本发明涉及一种从猪小肠粘膜中分离生化药物的工艺，特别涉及一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺。

（二）        背景技术

肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖，主要存在于肥大细胞中，具有抗凝血作用，被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗塞等的治疗。肝素的分子量大约3000—37500。肝素钠是肝素的钠盐。肝素钠作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视．也是我国主要的出口药物之一．随着研究的深入，人们发现肝素钠不但有抗凝、抗血栓形成和调节血脂的作用，还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等功能。猪小肠是肝素钠的重要来源之一，但是传统生产工艺在酶解时一次性加盐，如果加盐不超过3%，不能提升溶液中钠离子含量，肝素钠生成结合率低；如果加盐超过3%，则细胞分解时发生盐析作用，肝素析出率低，且树脂在高盐浓度下吸附率低，肝素钠产率低，肝素钠产品质量不稳定。

（三）        发明内容

本发明为了弥补现有生产技术的不足，解决了酶解和吸附过程中对盐度要求不同的矛盾，提供了一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，本发明肝素解离完全，肝素与钠离子结合率高，吸附率高，并实现了吸附时分解液快速降温防止肝素酶快速裂解肝素钠，收率高，肝素钠活性损失小，质量稳定。

本发明是通过如下技术方案实现的： 

一种利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，其特殊之处在于：其包括以下步骤（1）酶解：将猪小肠中粘膜取出，与水一起置于酶解罐中，粘膜与水的重量比为1:7-9，搅拌均匀后加入蛋白酶调节所得料液的pH值为8-9，加热至温度为55-58℃，然后加入肠衣专用盐至料液的盐度为2.2%-2.5%，保温1-3h，再加入肠衣专用盐至料液的盐度为4.5%-5.0%，保温0.2-1h，继续加热使温度达到80-85℃，保温20-50min后，过80目膜过滤，收集过滤液；

（2）吸附：将上述所得过滤液加入吸附罐中，搅拌，然后加水至盐度为2.2%-2.5%，温度为55-58℃，再加入树脂，搅拌8-10h，过滤，放出废液，收集过滤树脂；

（3）洗脱、沉淀脱盐、脱水：将过滤后所得的树脂经洗脱、沉脱盐淀、脱水干燥制得肝素钠。                                                                                   

本发明的利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，步骤（1）中，添加碱性蛋白酶，该碱性蛋白酶与酶解中粘膜的重量比为1：500，用尼龙布过滤，收集过滤液，其中碱性蛋白酶属于一种丝氨酸脆外高碱性蛋白酶，它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，具有较强的分解蛋白质的能力。

本发明的利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，步骤（2）中树脂的添加量按每根猪小肠加入20-30g树脂的比例添加。

本发明的利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，步骤（3）中，

洗脱：

（a）：反复冲洗过滤后的树脂；将冲洗干净的树脂倒入洗脱器中，加入质量分数为5%-7%的盐水，温度保持在40-60℃，开启搅拌机转速为20-40r/min，搅拌10-60min；

（b）：随后将废液倒掉，加入质量分数为15%-30%的盐水，温度保持在40-60℃，开启搅拌机转速20-40r/min，搅拌2-4h后，收集洗脱液；

（c）：重复步骤（b），将两次收集的洗脱液合并待用；

（d）：步骤（c）收集完洗脱液后，再接着加入质量分数为15%-30%的盐水，温度保持在40-60℃，开启搅拌机转速20-40r/min，搅拌10-60min后，收集洗脱液做高浓度盐水循环使用。

沉淀脱盐：

将洗脱液过滤移入沉淀罐中，边搅拌边加入质量分数为80%-85%的乙醇，乙醇与洗脱液的体积比为1.8-2.2:1，搅匀密封沉淀20-30h，收集沉淀物待用；

脱水：将收集的沉淀物滤干脱水；将脱水后的沉淀物移入烘箱在80-90℃下烘干6-8h即得肝素钠。

本发明的利用猪小肠高效提取肝素钠的工艺，所述的盐水是由肠衣专用盐加水配制而成。