[发明专利]一种预测前列腺癌易感性的检测试剂盒和方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种预测前列腺癌易感性的检测试剂盒和方法，更具体的说是通过测定与前列腺癌相关基因FOXP4基因5’端附近rs4714476位点多态性预测受试者对于前列腺癌的易感性，该方法可用于疾病的辅助诊断和新药开发，属于生物技术领域。

背景技术

前列腺癌（prostate cancer,PCa）是男性最常见的与老龄相关的恶性肿瘤，其发病机制尚不清楚，家族史和双生子研究表明遗传因素是PCa发生的一个重要危险因素。随着我国老龄化人口的增长，PCa的发病率正逐年增长（刘振伟,项永兵,张薇.上海市区1973～1999年PCa发病趋势分析.中国卫生统计,2003,20(6):335-337.），目前PCa特异性抗原（prostate specific antigen，PSA）在PCa筛查中的应用引起众多争议，现有的PCa筛查又多依赖PSA水平的检测，临床上发现，由于PSA检测精度的特异性和敏感性不足，带来了PCa的诊断不足和过度治疗的严重问题。然目前尚未见有替代PSA的临床早期筛查PCa技术的研究，原因是缺乏有效的PCa生物标志。研究表明越来越多的PCa遗传标志物的发现为PCa早期诊断提供了可能。

随着大规模全基因组关联研究（Genome-Wide Association Studies,GWAS）的出现，目前国外已经通过这种方法鉴定了50多个PCa易感SNPs位点，约解释25%的PCa遗传病因。证明了SNPs作为基因组标志的关联分析方法在PCa遗传研究中的有效性。SNPs是指染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性，在人群中的频率需>1%，SNPs是双等位基因标记，这种单碱基变化中有70.1%为同型碱基之间的转换：如G/A或T/C，29.1%为发生在嘌呤和嘧啶之间的颠换。C（胞嘧啶）是人类基因组中最易发生变化的位点，因为大多数是甲基化胞嘧啶，能够自发脱氨基转换为T（胸腺嘧啶），SNPs包含了已知多态性的80-90%，是最常见的遗传变异。

由于生存的选择压力导致SNP在单一基因和整个基因组中的分布呈不均匀性。SNPs在基因非编码区的数量是编码区的4倍，总数可达3百万个。SNPs以其密度高（平均每1kb就有1个）、代表性强（位于基因内部的SNPs可能直接影响蛋白质结构或表达水平）、遗传稳定性好（同微卫星多态性比较而言）、易于自动化分析（因SNPs在人群中为双等位基因标记，可简单以“＋/－或1/0”直接分型）等特点成为很好的遗传标志。

FOXP4（叉头转录因子P4）（forkhead box P4，FOXP4）基因是FOX转录因子家族的P亚家族，在胚胎发育、细胞周期调节和肿瘤形成中起主要作用，在野生小鼠组织和人类肿瘤组织中，FOXP4在肾癌患者组织中表达明显减少，Frohme et al.等研究也证明在喉癌时FOXP4的表达也减少。证明了FOXP4基因与肿瘤的相关性。目前，FOXP4在PCa中可能的作用还未被研究，然而，在与PCa发病机制及遗传机制相似的乳腺癌中，已经鉴定了FOXP4基因的变异或异位改变。

FOXP4基因上的PCa易感SNP位点rs1983891是2010年Takata R等在日本人群中GWAS研究鉴定的，FOXP4基因位于6p21，rs1983891位于FOXP4基因第2内含子，目前这一位点与PCa的关联性在欧洲、中国人群中已经被复制验证，而FOXP4基因及附近其他位点与PCa的风险还未见有研究报道，我们结合以上FOXP4与其他肿瘤有关的功能，在此基因及基因两端5KB内选择SNPs进行分型并分析了与PCa及PCa相关临床表型的相关性，鉴定出位于FOXP4基因5’端附近的rs4714476与PCa及PCa相关的临床信息关联。

Rs4714476位于6p上FOXP4基因5’端附近，FOXP4基因全长55.96kbp，在6p21上位置从41,622,142到41,678,099，rs4714476在染色体上位置为41,621,717，距离FOXP4基因仅425bp，可能会对FOXP4基因转录有调节作用，或者连锁有转录起始区的功能位点，经查询检索，截至目前，尚未见有FOXP4基因5’端附近rs4714476位点多态性与PCa的风险未见报道。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种检测前列腺癌易感性基因的方法。

本发明的第二个目的是提供一种检测前列腺癌易感性基因的试剂，包括PCR引物和含有该引物的试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：