[发明专利]中药有效成分免疫增强作用及新型免疫增强剂的研究

说明书

技术领域

 中药有效成分免疫增强作用及新型免疫增强剂的研究，属于药物学领域。

背景技术

畜禽传染病一直是危害畜牧业发展的首要问题，尤其是病毒性传染病，迄今尚无有效的治疗方法，疫苗预防仍是最重要的措施。但由于环境因素、使用方法、使用时间、机体状态、免疫抑制病等诸多方面的影响，多数疫苗只有与免疫增强剂配合使用才能发挥良好的防疫效果，但目前国内外广泛使用的油乳类、铝胶类等化学性免疫增强剂常有副作用大、局部刺激强、致癌、制备和使用麻烦或不能足够提高弱抗原的免疫原性等弊端。因此，研制高效、低毒的新型免疫增强剂已成为亟待解决的问题。中兽药是在独特中兽医理论指导之下用于防治动物疾病，具有天然性、多能性、低毒副、不易产生有害残留和耐药性等优点，被动物临床广泛应用，为保障我国畜牧业健康发展发挥了重要作用。研究表明，许多中药成分具有免疫增强作用，作为免疫增强剂具有显著的优势。

现代医学研究成果表明，中草药含有多糖类、有机酸类、生物碱类、甙类和挥发油类等，这些物质在动物机体内通过全面调整和充分发挥机体自身具有的免疫功能和适应力，而起到防病治病的作用。其中，多糖是中草药的重要组成成分，其功能主要表现为以下几个方面：①激活免疫细胞。②影响补体系统。③诱生细胞因子的产生；甙类化合物，如人参皂甙、黄芪甙、淫羊藿甙、柴胡皂苷等对免疫均有影响。

虽然中药免疫增强剂的研究和应用越来越普遍，但目前无论是国内或国外研究均存在下列问题：①缺乏评价免疫增强剂的动物模型或标准。②多数免疫增强剂是一些根据传统工艺生产的粗制剂。③免疫增强剂的研究，主要停留在中药对畜禽免疫系统功能指标上的改变，而从微观上阐述其机制报道的却不多。④许多中药或其活性成分对机体的免疫功能呈现双向调节作用，既能增强动物机体的免疫功能，又能抑制免疫功能。只有更加深刻地认清中草药免疫药理作用机理，才能为临床筛选和合理用药提供保证。

发明内容

本发明选择黄芪、党参、淫羊藿、甘草四种中药为研究对象。其中，黄芪的主要活性成分为黄芪多糖，研究表明，黄芪多糖可以增强鸡巨噬细胞的吞噬能力，提高淋巴细胞转化率等；党参、甘草具有促进细胞因子产生的作用，具有抗病毒，增强杀伤细胞、自然杀伤细胞杀伤活性，调节体液免疫和细胞免疫的功能；淫羊藿的活性成分为淫羊藿多糖、淫羊藿黄酮与淫羊藿苷，均具有显著的免疫活性，在抗肿瘤、抗氧化、提高机体免疫功能方而发挥重要作用，并对疫苗具有免疫辅助效果。该研究以海兰褐雏鸡为动物模型，系统研究了四种中药有效成分组成的单方、复方制剂以及不同含量情况下的免疫调节作用，筛选出作用较好的中药成分和组方，为中药免疫增强剂的研制提供了依据。

具体实施方式

首先是对实验动物的选择，该课题所用实验动物为150只1日龄海兰褐公鸡，购自泰安市东岳种禽场，试验前用相应ELISA抗体检测试剂盒（IDEXX公司产品）检测REV抗体阳性率＜2.3%。将其随机分为15组。1组为健康组，不接种REV；2-15组为接种REV组，1日龄大腿内侧肌肉接种REV病毒稀释液（500TCID50/只）。各组试验鸡均按常规方式饲养与接种疫苗。

其次，本课题选择增强免疫作用较好的黄芪、党参、淫羊藿、甘草四种中药作为研究对象，针对各中药有效成分的理化性质，采用水煮沸提取法，分别将各试验中药加8倍量的自来水浸泡过夜，煮沸2小时后过滤，滤渣再加5倍量自来水煮沸2小时过滤，合并两次滤液，煮沸去水浓缩至含中药材1g/ml，得中药提取物H、D、Y、G（以各中药汉语拼音第一个字母表示）。

再次，对提取的中药成分进行体外与体内筛选试验。体外筛选的具体方法为：将4种浓度的H、D、Y、G中药成分分别加入到培养的鸡脾脏淋巴细胞中，培养48h后，用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。根据浓度试验结果，选出各药的适宜浓度，进一步比较它们作用的差异；体内筛选试验的具体方法为：90只11日龄雏鸡，随机均分为9组，试验组分别肌肉注射高、低剂量的四种中药成分，对照组注射同量生理盐水，每天1次，连续3天；14日龄用新城疫Ⅳ系弱毒疫苗首免，28日龄二免。分别在35、42、49和56日龄心脏采血、测定T淋巴细胞增殖的动态变化。根据试验结果，结合体外试验研究结果筛选出可作为新型免疫增强剂的候选中药。

第四，研究复方中药成分的免疫增强作用，将H、D、Y、G四种中药成分分别两两组合成多个复方，注射13日龄雏鸡，连续3天，在末次注射同时用ND-Ⅳ系苗免疫，然后分别在免疫后第7、14、21、28天每组随机翅静脉采血5只，检测ND-HI抗体效价。