[发明专利]一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法

权利要求书

1.本发明涉及一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法，其步骤如下：降香檀叶经匀浆破碎酶诱导后，将酶解液抽滤，所得固形物用乙醇提取，合并酶解液及乙醇提取液，浓缩后加入40～50℃水，空化振荡分散、静止，所得到的分散物经液液萃取、大孔吸附树脂富集和一次正相硅胶中压柱层析分离后分别得到鹰嘴豆芽素A和染料木素粗品，再经过低温析晶和重结晶技术得到纯度95%以上的鹰嘴豆芽素A和染料木素单体，最后通过MTT法测定鹰嘴豆芽素A和染料木素的抗肿瘤细胞活性。

2.按照权利要求1所述的一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法，其特征在于：所述的匀浆破碎酶诱导所用的酶为纤维素酶、果胶酶或葡萄糖苷酶中的任意两种或三种以等质量比混合所组成的复合酶，复合酶用量为材料质量的0.2～1.5%，酶诱导溶剂为40～50℃的温水，溶剂用量为5～10ml/g材料，诱导时间为5～10min。

3.按照权利要求1所述的一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法，其特征在于：所述的乙醇提取所用的溶剂为70～95%的乙醇，提取所用的溶剂体积为固体质量的8～15倍，提取方法包括超声波辅助提取、浸泡提取、负压空化提取和微波辅助提取。

4.按照权利要求1所述的一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法，其特征在于：所述的空化振荡分散是在提取物浓缩物中加入40～50℃水的体积为浓缩物的4～8倍，空化振荡时间为40～60min，静止时间为15～20min。

5.按照权利要求1所述的一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法，其特征在于：所述的液液萃取所用溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷，萃取所用溶剂体积为体系的1/2，萃取次数为2～5次，回收有机溶剂所得固形物为目标物。

6.按照权利要求1所述的一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂富集所用的树脂为ME-2、HPD-500、ADS-5、H103、HP-20、YWD-01、DA201或S8，大孔吸附树脂采用湿法装柱，保留液面，将萃取所得到的固形物用水配制成料液浓度为10～25mgmL混悬液，上样量1.0～3.0BV，以流速为每小时6～9mL/g树脂条件下过吸附柱，吸附后用20～40%乙醇2BV洗杂质，然后分别用50～60%和70～90%的乙醇8～10BV解吸，分别收集解吸液，浓缩至干，所得固形物为目标化合物粗品。

7.按照权利要求1所述的一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法，其特征在于：所述的正相硅胶中压柱层析所用样品为树脂富集后所得的目标化合物粗品，所用硅胶为300～800目的正相硅胶，所用硅胶量为样品质量的15～25倍，所用流动相为正己烷或石油醚与二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中的一种按照体积比30：1～0：1混合体系，采用湿法装柱；将样品用少量有机溶剂溶解，加入与浸膏质量比为1：1（w/w）的层析硅胶拌匀、减压蒸干，加在预先装好的硅胶柱中，以10～20BV的流速进行连续中压梯度洗脱，收集洗脱液；用硅胶薄层层析检测洗脱成分，合并相同部分，展开剂为正己烷：乙酸乙酯=5：1～1：1，紫外波长为254nm。

8.按照权利要求1所述的一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法，其特征在于：所述的重结晶所用的溶剂为石油醚、正己烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和丙酮，所用溶剂比例为石油醚或正己烷：乙酸乙酯、三氯甲烷或丙酮=20：1～1：1，低温析晶的温度条件为﹣10～4℃。