[发明专利]一种制备端粒酶多肽疫苗的方法

权利要求书

1.一种制备端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，包括以下步骤:

1) 由Fmoc-L-Lys(Boc)-OH和固相合成树脂为起始原料，反应得到Fmoc-L-Lys(Boc)-树脂；

2) 将Fmoc-L-Lys(Boc)-树脂采用Fmoc固相多肽合成方法按端粒酶多肽疫苗GV1001的多肽序列逐一偶联得到侧链基团保护的GV1001-树脂；

3) 裂解侧链基团保护的GV1001-树脂，纯化、冻干得到端粒酶多肽疫苗GV1001；

其中：所述固相合成树脂包括但不限于CTC树脂、WANG树脂或HMPA树脂；所述端粒酶多肽疫苗GV1001的序列为：H-L-Glu-L-Ala-L-Arg-L-Pro-L-Ala-L-Leu-L-Leu-L-Thr-L-Ser-L-Arg-L-Leu-L-Arg-L-Phe-L-Ile-L-Pro-L-Lys-OH。

2.根据权利要求1所述制备端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，其特征在于：所述固相合成树脂的担载量为0.1 mmol/g-1.6 mmol/g，优选固相合成树脂的担载量为0.5 mmol/g-1.0 mmol/g。

3.根据权利要求1所述制备端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，其特征在于：所述的步骤1中，Fmoc-L-Lys(Boc)-OH和CTC树脂在有机碱的作用下，在反应溶剂中生成Fmoc-L-Lys(Boc)-CTC树脂；所述的有机碱包括TMP、NMM或DIPEA；所述的反应溶剂包括NMP和/或DMF。

4.根据权利要求1所述制备端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，其特征在于：所述的步骤1中，Fmoc-L-Lys(Boc)-OH在催化剂和偶联剂存在下，在反应溶剂中和WANG树脂或HMPA树脂生成Fmoc-L-Lys(Boc)-WANG树脂或Fmoc-L-Lys(Boc)-HMPA树脂；所述的催化剂为DMAP，所述的偶联剂包括DCC、DIC、DBC、DCC/HOBt、DIC/HOBt、HATU/HOAt/有机碱、HBTU/HOBt/有机碱、TBTU/HOBt/有机碱或PyBOP/HOBt/有机碱；所述的反应溶剂包括NMP和/或DMF；所述的有机碱包括TMP、NMM或DIPEA。

5.根据权利要求1所述制备端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，其特征在于：所述的步骤2中，Fmoc-L-Lys(Boc)-树脂经过重复的脱保护及与各Fmoc保护氨基酸在反应溶剂中在偶联剂的作用下偶联，生成侧链基团保护的GV1001-树脂；所述的偶联剂包括DCC/HOBt、DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/有机碱、HBTU/HOBt/有机碱、HATU/HOAt/有机碱或TBTU/HOBt/有机碱；所述的有机碱包括TMP、NMM或DIPEA；所述的反应溶剂包括NMP和/或DMF；所述的Fmoc保护氨基酸依次为：Fmoc-L-Pro-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Pro-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH。

6.根据权利要求1所述制备端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，其特征在于：所述步骤3中，裂解试剂为：TFA/H₂O、TFA/H₂O/TIS、TFA/thioanisole/anisole/EDT或TFA/thioanisole/H₂O/phenol/EDT；优选体积比为90/5/3/2的TFA/thioanisole/anisole/EDT，或体积比为82.5/5/5/5/2.5的TFA/thioanisole/H₂O/phenol/EDT。