[发明专利]一种低温沼气固体复合促进剂及其制备方法

权利要求书

1.一种低温沼气固体复合促进剂的制备方法，其特征在于，制备方法包括以下步骤：通过选用短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus) CICC10440、乳酸链球菌（Streptococcus lactis）CICC 20711、假单胞菌（Pseudomonas sp.）CGMCC No.4764和成团泛菌（Pantoea agglomerans）CGMCC No.4765,分别通过纯化复壮，并获得新鲜的纯培养发酵液，将上述四种菌的纯培养发酵液按质量比1:1:1:1比例混匀，将混合液再与等质量的豆粕和麸皮混合拌匀, 豆粕和麸皮按重量比1：1混合,将上述混合物摊放于阴凉干燥环境中阴干，然后添加6%-36%的三氯化铁和1.2%-7.2%的氯化镍充分拌匀，制备获得低温沼气固体复合促进剂。

2.如权利要求1所述低温沼气固体复合促进剂的制备方法，其特征在于，

所述的短小芽孢杆菌CICC10440采用蛋白胨 5克 牛肉膏 3克,氯化钠 5克 琼脂 15克,蒸馏水 1000毫升作为培养基， 调pH至7.0,培养芽孢杆菌时，加入5mg MnSO₄.H₂O；

所述的乳酸链球菌CICC20711采用酪蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母粉 5.0g，葡萄糖 5.0g，乙酸钠 5.0g，柠檬酸二胺 2.0g，Tween 80 1.0g，K₂HPO₄ 2.0g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，MnSO₄·H₂O 0.05g，CaCO₃ 20.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L作为培养基，pH6.8；

所述的假单胞菌（Pseudomonas sp.）CGMCC No.4764采用LB液体培养基培养24小时制备菌种，取菌种200毫升接种至10升PR培养基中；发酵温度为28℃，并用NH₄OH 28%溶液将pH恒定调节至6-8，优选6.8；搅拌速率为400 rpm，通气量设定为0.4（V/V）；当生物量的浓度达到10g/L-40g/L时停上发酵；

所述的成团泛菌（Pantoea agglomerans）CGMCC No.4765采用R4F液体培养基培养24小时制备菌种，取菌种250毫升接种至10升R4F培养基中；发酵温度为28℃，并用NH₄OH 28%溶液将pH恒定调节至6-8，优选7.0；搅拌速率为100 rpm，通气量设定为0.2（V/V）；当生物量的浓度达到10g/L-30g/L时停上发酵。

3.如权利要求2所述低温沼气固体复合促进剂的制备方法，其特征在于，所述的R4F培养基：每1000mL蒸馏水中加入2克牛肉膏；3克蛋白胨；0.05克MgSO4·7H₂O；0.5克K₂HPO4；0.05克FeSO₄·7H₂O；0.05克MnSO₄·H₂O；20克蔗糖； 18-20克琼脂粉。

4.如权利要求1至3任意一项所述制备方法获得低温沼气固体复合促进剂。

5.如权利要求4所述的固体复合促进剂在冬季沼气池中应用。