[发明专利]阳离子型咪唑Gemini表面活性剂[Cn-s-Cnim]Br2在基因转染中的应用

权利要求书

1.一种阳离子型咪唑Gemini表面活性剂[C_n-s-C_nim]Br₂在基因转染中的应用，所述阳离子型咪唑Gemini表面活性剂，通式为[C_n-s-C_nim]Br₂，n=10,12,14；s=2,4,6,作为非病毒基因载体直接应用于基因转染时，先将[C_n-s-C_nim]Br₂溶解于pH 6.8-7.5的磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液中，取100μL加入到培养的细胞中，孵育24小时，利用酶标仪测试细胞样品的吸光度值来测试细胞的存活率，通过细胞存活率判定[C_n-s-C_nim]Br₂细胞毒性；所述的细胞包括人胚肾细胞（HEK293细胞）、人宫颈癌细胞（HeLa细胞）、人非小细胞肺癌细胞（A549Y-10细胞）或人口腔表皮样癌细胞（KB细胞）。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述阳离子型咪唑Gemini表面活性剂选自[C₁₂-2-C ₁₂im]Br₂、[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂和[C₁₂-6-C₁₂im]Br₂；其中，优选[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于阳离子型咪唑Gemini表面活性剂[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂有效诱导DNA凝聚形成[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂/DNA纳米复合物，包括步骤如下：

分别用缓冲液配制[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂溶液和DNA溶液，[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂与DNA按照Z_+/-为（1~50）:（10~1）的摩尔比制备混合溶液，使DNA溶液的终浓度为1×10^-6mol/L~1×10^-4mol/L，再将该混合溶液室温下孵育15~40分钟，得到[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂/DNA纳米复合物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂与DNA按照Z_+/-为（1~2）:（10~1）的摩尔比；优选地，所述[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂与DNA按照Z+/-为（1~2）:（2~1）的摩尔比。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于制备DNA溶液和[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂溶液的混合溶液时，将两种溶液混匀并漩涡震荡15~40秒；优选地，漩涡震荡30秒；混合溶液中DNA溶液的终浓度保持在1×10^-5mol/L。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于用[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂/DNA纳米复合物进行基因转染的方法为：取制备的[C₁₂-4-C₁₂im]Br₂/DNA纳米复合物200μL加入到培养的细胞中，所述的细胞选自人胚肾细胞HEK293细胞或人宫颈癌细胞HeLa细胞；经过24小时的孵育，用荧光倒置显微镜测定质粒DNA上的绿色荧光蛋白（GFP）基因的表达。