[发明专利]一种贯众提取物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药的提取物，具体地说是一种贵州中草药贯众的提取物，同时还涉及贯众的提取物的制备方法和应用。 

背景技术

人体衰老与恶性肿瘤的发生均于人体细胞中过量的自由基，特别是与活性氧自由基有关。人体每个细胞的DNA每天都要受到104次氧化攻击而引起损伤。自由基摧毁细胞膜，使细胞不能吐故纳新，并丧失了对细菌和病毒的抵御能力；自由基攻击正在复制中的基因，造成基因突变，诱发癌症的发生。而癌症的发病率以每年在3%到5%的速度在提高，以癌症引起的死亡率已经成为世界第一的死亡率。因此，寻找有效的抗癌抗氧化的药物仍是全球性的严峻课题。 

发明人一直从事中草药有效成分的提取分离及活性研究，特别重视抗癌和抗氧化发面的药物的有效成分的提取及活性研究，发明人研究发现贯众提取物具有抗癌和和抗氧化的作用。 

贯众为鳞毛蕨科植物贯众属植物的干燥根茎及叶柄残基，附生林下，产于贵州、云南、四川、西藏等。其味苦、微寒，有小毒，归肝，胃经，具有清热解毒、驱虫等功能。现代药理研究表明，具有抗病毒、驱虫、抗肿瘤、兴奋子宫等作用，临床用于治疗肺炎、乙型肝炎、肠道寄生虫病、妇产科出血等。但在现有的中医中药资料中，尚未发现将贯众的提取物用于治疗癌症或具有抗癌和抗氧化作用的记载和报道。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种贯众的提取物。 

同时，本发明的目的还在于提供一种贯众的提取物的制备方法。 

本发明的目的还在于提供一种贯众的提取物在制备抗癌和抗氧化药物方面的应用。 

为了实现上述目的，本发明一种贯众提取物及其制备方法和应用，其提取物是以中药贯众为原料，经乙醇浸提而得的一种贯众乙醇提取液，回收溶剂后得到乙醇总提取物，水分散后依次使用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，回收乙酸乙酯和正丁醇溶剂后，得到乙酸乙酯和正丁醇萃取物。将乙酸乙酯和正丁醇萃取物进行柱层析，得到16个粗分段。将贯众乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及粗分段进行抗癌抗氧化活性测试，测试结果表明，贯众的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及部分粗分段均有较好的抗癌抗氧化的活性。 

本发明一种贯众提取物的制备方法，按以下步骤制备： 

(1) 将干燥的贯众的块茎粉碎后，加入2-3倍原料和总量的80%的乙醇水溶液加热回流提取，第一次回流提取6小时，第二次回流提取3小时，第三次回流提取1小时，然后合并三次乙醇浸提液。

(2) 将三次合并的乙醇浸提液减压蒸馏，回收乙醇溶液，得到乙醇总提取物浸膏，将乙醇浸膏水分散，一次使用10升的石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇分别萃取3次。 

(3) 将乙酸乙酯和正丁醇萃取液减压蒸馏，回收溶剂，得到乙酸乙酯和正丁醇萃取物。

(4) 将乙酸乙酯和正丁醇萃取物进行柱层析，得到16个粗分段。 

本发明一种贯众提取物的应用是指贯众的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及粗分段用于制备抗癌药物方面的应用。 

本发明一种贯众提取物的应用是指贯众的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及粗分段用于制备抗氧化药物方面的应用。 

将贯众的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及粗分段使用DMSO溶解，阿霉素为阳性对照药，0.1%的DMSO的培养基为阴性对照，使用MTT法，对人类前列腺癌细胞PC3，胃癌细胞BGC-823，乳腺癌细胞Bcap-37以及黑色肉瘤细胞A375体外抑制增殖的生物活性研究。研究表明贯众的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及部分粗分段对这四种癌细胞具有较好的抑制作用。 

将贯众的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及粗分段使用无水乙醇溶解，维生素C为阳性对照药，无水乙醇为阴性对照，使用DPPH微孔板法测其抗氧化生物活性测试。测试结果表明贯众的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及部分粗分段具有较好的抗氧化生物活性，甚至高于维生素C的抗氧化能力 

附图说明：贯众属植物的主要化学成分主要是萜类、酚类、甾体类化合物，因此为研究其主要抗癌抗氧化化学成分，本发明涉及使用气质联用的方法对活性较好的提取层进行化学成分分析。

图1：山地贯众乙酸乙酯层化学成分分析。 

在保留时间15分钟和30分钟左右峰面积较多，由此可知在此保留时间的化合物主要是萜类和酚类化合物，因此萜类和酚类物质可能是此萃取层的主要活性成分。 

图2：山地贯众正丁醇层化学成分分析。 

在保留时间30分钟左右峰面积最多，由此可知在此保留时间出现的化合物主要是萜类化合物，因此在此萃取层主要的活性物质是萜类成分。