[发明专利]头霉素C的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种头霉素C的分离纯化方法，可将发酵所得头霉素C纯度提高至90%以上。

背景技术

头霉素C（cephamycin C）最早见于默克公司1971年发表的专利中。它是继青霉素、头孢菌素后又一类新的β-内酰胺类抗生素。属头孢稀类抗生素，抗菌作用机制与青霉素类相同。

头霉素C的钠盐为白色结晶性粉末。对酸比青霉素G稳定，抗菌力低，仅略高于头孢菌素C。它的结构与头孢菌素相似，但在头孢稀母核C7上有一个α-甲氧基，提高了对β-内酰胺酶（包括青霉素酶和头孢菌素酶）的抗性。

它的发现不仅为头孢菌素类抗生素提供了更广泛的天然来源，也产生了一类新型抗生素，头霉素类抗生素。

头孢烯类抗生素是临床抗感染治疗中应用最广泛的一类安全有效的抗菌药物。虽然由于细菌耐药性的发展，原来对头孢菌素敏感性很高的某些致病菌由于产生了新的灭活酶如广谱β-内酰胺酶(ESBLs)，对头孢菌素的敏感率有所下降，但总的看来临床常用的大多数头孢菌素类与头霉素类抗生素仍是目前控制多数常见感染疾患和救治某些重症感染疾患不可缺少的有效药物。头霉素类抗菌活性大多与二代头孢菌素相似，个别品种具有三代头孢菌素特点。

发明内容

本发明的目的是提供一种头霉素C的分离纯化方法，可有效大幅度提高头霉素C纯度。

为了解决以上技术问题，本发明采取以下技术方案：

头霉素C的分离纯化方法，包括以下步骤：

a)经过预处理的头霉素C发酵滤液通入大孔树脂后，采用大孔树脂解吸剂解吸，所得解吸液减压浓缩，得到头霉素C固体粗品；

b)上述头霉素C固体粗品水溶后通入UniCM-50s型阳离子树脂后，采用阳离子树脂解吸剂解吸，解吸后得到阳离子树脂解吸液；

c)上述所得阳离子树脂解吸液通入大孔树脂后，采用大孔树脂解吸剂解吸后得到头霉素富集液，头霉素富集液在丙酮中沉淀结晶，得到纯度90%以上的头霉素C固体。

进一步的技术方案是：所述头霉素C发酵滤液需经过预处理，预处理的方法是用4N氢氧化钠调pH至6~7。

进一步的技术方案是：所述大孔树脂为HZ806大孔树脂。

进一步的技术方案是：所述步骤a)中大孔树脂解吸剂为90%乙醇。

进一步的技术方案是：所述UniCM-50s型阳离子树脂粒径为50μm。

进一步的技术方案是：调节头霉素C固体粗品水溶液的pH为5~7。

进一步的技术方案是：所述阳离子树脂解吸剂为0.3、0.4或0.5mol/L磷酸二氢钠水溶液，优选0.4mol/L磷酸二氢钠水溶液。

进一步的技术方案是：所述阳离子树脂在使用前需进行预处理，预处理方法为90%乙醇冲洗，2%氢氧化钠冲洗，纯水冲至中性，2%盐酸冲洗，纯水冲至中性。

进一步的技术方案是：所述步骤c)中大孔树脂仍为HZ806大孔树脂；所述步骤c)中的大孔树脂解吸剂为95%乙醇。

进一步的技术方案是：所述步骤c)中的沉淀结晶的方法为，头霉素C富集液缓慢倒入3倍体积的丙酮中，沉淀结晶，布氏漏斗进行过滤，滤出的固体真空干燥箱抽干，得到白色固体头霉素C。

本发明的技术效果是：本发明涉及的头霉素C的分离纯化方法，工艺操作简单，工艺条件易于控制，头霉素C纯度提高至90%以上，更适于大规模的生产。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但不是对本发明的限定。另外，下面实验操作均是在室温20~30℃进行。

头霉素C的发酵液采用以下方法而得：

头霉素C由链霉菌发酵，培养基主要成分及比例（重量/体积）为淀粉5%、葡萄糖1%、磷酸氢二钾0.2%、蛋白胨1%、棉子粉2%。发酵条件控制在pH7~7.5，温度控制在35摄氏度。培养120小时后，制得头霉素C发酵液。

实施例1

头霉素C的分离纯化方法包括以下步骤：

步骤a)：头霉素C发酵液过滤后约10升滤液，用4N氢氧化钠调滤液pH至6~7，通入500ml大孔树脂HZ806，流速为每小时2升；然后，纯水750ml顶洗；再用1.5升90%乙醇解吸，解吸流速每小时1升。解吸液从300ml后开始收集，收集所得的解吸液减压旋干，得头霉素C固体粗品20克。