[发明专利]一种适宜脱毒兔眼蓝莓的高效快繁技术

权利要求书

1.一种适宜脱毒兔眼蓝莓的高效快繁技术，其特征在于，采用外植体材料为当年生幼嫩枝，通过以下步骤获得优质脱毒苗：

a、嫩枝摘除叶片，清洗嫩枝，嫩枝切段形成单芽茎段，然后放置在培养基中培养，完成无菌苗的获得步骤；

b、待单芽茎段叶芽伸长后，切下叶芽转接在改良培养基中，完成丛生芽的诱导与增殖步骤，将获得的无菌苗转接到不同的增值培养基上进行比较，丛生芽生长速度慢，从增殖率、丛生芽长势、玉米素成本方面进行综合考虑，得到最佳的改良培养基，以完成丛生芽的诱导与增殖的改良；

c、取无菌苗植株上碧绿的叶片，按照不同的叶片切法、不同的培养方式、不同浓度的ZT筛选最合适的叶片，培养在改良培养基中，完成叶片再生体系的建立步骤，进行叶片不同部位对重生苗诱导的影响测试，按垂直叶片主脉方向将叶片切成二部分，叶片背面朝下接种于培养瓶内，统计重生率，进行不同暗培养时间对叶片重生苗诱导的影响测试，随着暗培养时间的延长，重生苗诱导频率呈增高趋势，不经暗培养直接在光照培养条件下或暗培养条件下的重生率，进行ZT浓度对诱导叶片重生苗的影响测试，测试不同浓度的ZT对叶片重生苗的诱导作用，以完成叶片再生体系的建立的改良；

d、剪取苗的单芽茎段，在改良培养基中培养，从不同盐浓度、不同活性炭浓度、不同IBA浓度的培养基中筛选出最适宜生根培养基，完成试管苗生根培养步骤，进行盐浓度对生根的影响测试，进行单个芽苗在不同盐浓度的生根培养基中的生根诱导率存在差异比对，进行活性碳和生长素对生根的影响测试，活性碳对组培苗瓶内生根具有重要影响，当培养基中无活性碳时，插入培养基中的茎基部均先长愈伤组织然后生根，由于茎根之间维管束不通，不久茎即停止生长，叶色发红脱落，苗长势差，活性炭对生根具有促进作用，以完成试管苗的瓶内生根改良；

e、在炼苗基质中培养，炼苗时打开培养瓶的瓶盖进行培养环境的过渡，在湿度100％的室内环境下培养，然后过渡到湿度80％、透光度70％的室外条件下，然后再逐步通风换气环境下培养，统计成活率，完成炼苗步骤，剪取2cm左右长的无菌苗新梢在生根培养基中生长，约45d左右苗高长至5-6cm时，生根率达95％，对生根苗移栽在5种不同基质上，统计成活率，以完成炼苗基质的优化。

2.根据权利要求1所述的适宜脱毒兔眼蓝莓的高效快繁技术，其特征在于，步骤：脱毒组培苗的获得是以田间生长的当年生嫩枝为初始外植体，摘除叶片，用洗衣粉水溶液洗净灰尘等污物后，经自来水冲洗，转到超净工作台上，先后用75％酒精和0.1％升汞对外植体分别进行50s与10min的表面灭菌，接着用无菌水冲洗4次，每次约2min，最后用无菌滤纸吸去外植体表面水分，将枝条切成1-2cm长的单芽茎段，WPM培养基具体改良方法：以Ca(NO₃)₂·4H ₂O、KNO₃代替原WPM培养基中的K₂SO4、CaCl₂，在无菌条件下将单芽茎段接种于改良WPM、1.0mg/L ZT、20g/L蔗糖和9g/L日产琼脂粉的培养基(pH＝5.2)上诱导侧芽萌发，培养条件为温度25±2℃、光强2500Lx、经过光周期16h光照和8h黑暗的光周期，30d后茎段叶芽伸长约4-6cm，叶片数量达7-9枚。

3.根据权利要求2所述的适宜脱毒兔眼蓝莓的高效快繁技术，其特征在于，步骤：丛生芽的诱导与增殖是待茎段叶芽伸长后，切下转接于以改良WPM为基本培养基，加蔗糖20g/L，日产琼脂粉8.8g/L，附加不同浓度的ZT和/或6-BA的增殖培养基(pH＝5.2)中，培养条件为温度25±2℃、光强2500Lx、经过光周期16h光照和8h黑暗的光周期。