[发明专利]一种凝结芽孢杆菌的固体发酵生产方法

权利要求书

1.一种凝结芽孢杆菌的固体发酵生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）菌种活化：将-80℃保存的菌种在固体种子培养基固体平板上划线，在温度为37~40℃的条件下培养20~24小时，所述菌种为凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）；

（2）制备一级种子：将活化的凝结芽孢杆菌，用接种环挑取三到五环接种于200 mL 液体种子培养基中，将三角瓶置于摇床中，在温度为37~40℃和250rpm的条件下，振荡培养20~24小时后，制得一级种子菌；

（3）配制固体发酵培养基：将固体干基加入质量比为1:1~2的无菌水，并在pH值为自然条件下，搅拌均匀，将固体培养基在温度为121℃条件下，高温高压灭菌20min，待冷却后即可作为固体发酵培养基使用；

（4）固体发酵：将经过灭菌处理的固体发酵培养基按照8~10%的接种量接入一级种子菌，搅拌均匀，保持湿度为50~70%和温度为37~40℃的条件下，培养20~24小时，制得二级种子；

（5）将得到的二级种子，按照步骤（4）进一步固体发酵得到三级种子；

（6）可以根据具体的培养用量，进一步将三级种子按照步骤（4）进一步固体发酵扩大培养；

（7）将凝结芽孢杆菌培养物进行菌落计数，活菌体浓度可达9.10×10⁹ CFU/g 鲜曲，芽孢浓度可达2.45×10⁹ CFU/g 鲜曲。

2.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌的固体发酵生产方法，其特征在于：所述步骤（1）中固体种子培养基的组成为：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g、25%浓度MnSO₄添加至0.2%，和琼脂粉15g。

3.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌的固体发酵生产方法，其特征在于：所述步骤（2）中的液体种子培养基的组成为：胰化蛋白胨 10g、酵母提取物 5g、NaCl 10g，和25%浓度MnSO₄添加至0.2%。

4.根据权利要求3所述的凝结芽孢杆菌的固体发酵生产方法，其特征在于：所述培养基均通过高温高压灭菌后使用。

5.根据权利要求1所述的凝结芽孢杆菌的固体发酵生产方法，其特征在于：所述步骤（3）中的固体干基为：以玉米粉和豆饼粉为基础料、KH₂PO₄ 0.3~0.5wt%、MnSO₄·H2O 0.02wt%和MgSO₄·7H₂O 0.125wt‰。

6.根据权利要求5所述的凝结芽孢杆菌的固体发酵生产方法，其特征在于：所述基础料中玉米粉与豆饼粉的质量之比为2:1。

7.权利要求1-6任一项所述的凝结芽孢杆菌的固体发酵生产方法制备的凝结芽孢杆菌培养物用于动物养殖业中的饲料添加剂。

8.根据权利要求7所述的凝结芽孢杆菌培养物用于动物养殖业中的饲料添加剂，其特征在于：所述的凝结芽孢杆菌培养物的添加量为1~3wt%。